拟南芥根干细胞发育以及向重力反应中AtIAA15的作用研究

来源 :武汉大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:taiguomin
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
作为植物体内促进生长的一种激素,生长素被其受体TIR1/AFB1/AFB2/AFB3所感知,促进了抑制因子AUX/IAAs的降解,从而解除了AUX/IAAs对于Auxin response factors(ARFs)的抑制作用,ARFs作为转录因子可以结合到下游基因的启动子上,启动下游反应。拟南芥AUX/IAAs家族有29个成员,对于该家族的研究主要集中在功能获得性突变体方面。本文选取AtIAA15作为研究对象,通过超表达和抑制表达两方面实验来研究该基因在植物发育以及生长素信号途径中的作用。获得的主要结论有:1.AtIAA15超表达株系的表型AtIAA15超表达株系表现出植物生长发育的一系列缺陷,主要有植株瘦弱矮小,顶端优势不明显,育性降低,角果短小褶皱。对地下部分的观察表明,超表达株系的向重力性部分丢失,根分生区长度变短,主根变短,根干细胞槽的分化受到了抑制,表现在淀粉粒染色实验时成熟的根冠细胞层数的减少。2.超表达AtIAA15对于生长素信号途径的影响上述AtIAA15超表达株系的发育方面的表型与生长素信号途径受到抑制后的表型比较类似,将AtIAA15超表达株系与生长素信号途径的标记株系DR5::GUS杂交,通过对杂交后代的分析表明生长素在根尖的积聚变多,同时生长素在根的伸长区的积累变多,暗示由茎向根的生长素的极性运输Polar Auxin Transport(PAT)可能受到影响。进一步将AtIAA15超表达株系与PAT相关标记株系PIN1pro::PIN1-GFP, PIN2pro::PIN2-GFP, PIN3pro::PIN3-GFP, PIN7pro::PIN7-GFP以及AUX1pro::AUX1-YFP杂交,对于杂交后代的激光共聚焦显微镜(confocal)分析显示PIN2-GFP,PIN3-GFP,PIN7-GFP,AUX1-YFP在超表达株系中降低明显,而PIN1-GFP没有明显变化。3.超表达AtIAA15对于根干细胞发育相关调控因子的影响在拟南芥中,根干细胞槽的发育受到生长素和一系列转录因子的调控,其中最重要的是WUSCHEL-RELATED HOMEOBOX5(WOX5)和PLETHORA (PLT) AP2-domain transcription factors这两种转录因子。将AtIAA15超表达株系与相关标记株系PLT1pro::CFP(影响干细胞发育的重要转录因子),WOX5pro::GFP(标记静止中心Quiescent Center,QC), J2341(标记静止中心QC和根冠干细胞columella stem cell,CSC)杂交。通过对杂交后代分析显示:WOX5pro::GFP在超表达突变体中出现异位表达,暗示静止中心区域扩大。J2341荧光强度变弱,可以观察到两层以上的根冠干细胞,暗示根冠干细胞向根冠细胞的分化受到阻碍。PLT1pro::CFP荧光强度降低明显。4.AtIAA15下游靶基因的鉴定ARFs家族有23个成员,将ARFs的部分或者全长cDNA构建到载体pGADT7中,将AtIAA15全长cDNA构建到载体pGBKT7中,通过酵母双杂交验证表明,AtIAA15潜在的靶基因是ARF5和ARF6。5. AtIAA15的表达模式分析通过PCR将AtIAA15启始密码子ATG上游约2.4kb的基因组序列扩增后连接到GUS载体pBI101.2并转化拟南芥。对获得的转基因植株的染色分析显示,AtIAA15的表达集中在茎尖和根尖分生组织,在侧根起始位置,成熟侧根的根尖,叶脉以及柱头也有表达。10μmol/L IAA处理显示,AtIAA15的表达在12h和24h都受到大量诱导。通过GFP-IAA15融合蛋白分析发现,IAA15蛋白定位在细胞核中。
其他文献
<正> 中国加入WTO将给世界经济带来深刻的影响。这已成为共识。其中对日本经济带来的影响也是巨大的。日本三菱综合研究所根据CGE(可计算一般均衡)模型推测,中国加入WTO后,可
会议
非正式组织客观地存在于每一个组织群体之中,正确认识和妥善处理组织中的非正式群体问题,对于利用其积极因素,克服其消极因素,实现企业的绩效目标,都具有重要的现实意义.
写作教学是中学语文教学中的重要环节,但由于重视程度不够或缺乏创新意识,导致传统的写作教学弊端重重,效率低,问题多。要转变这种情况,必须要更新观念,开拓思维,提升写作效
为推广应用“十一五”国家科技计划支撑课题新成果,加快提高农村饮水安全消毒技术水平与水质合格率,2010年水利部批准实施了科技推广计划项目“农村饮水安全消毒集成技术的推广
蘸着沧桑写风流——记漫水河四中队学济南交警活动先进事迹□但修文学济南交警专版在皖、鄂两省交界的大别山腹地有座小镇——漫水河镇。霍山县公安局交警大队执勤四中队就坐
民事习惯对于民事立法而言,具有补充立法、促进本土法律资源有效利用及推动民事立法顺利实施等价值。民事习惯在我国民事立法中应有合理定位,未来民事立法应确立“凡法律未规定
为客观评价壮筋补骨丸促进骨折愈合的作用,选用30只雄性新西兰兔造成右侧桡骨3mm完全缺损的骨折模型,随机分为模型组、伤科组和壮筋组,分别给予生理盐水,伤科接骨片和壮筋补骨丸
据四川省公安厅统计,截至本期发稿,今年我省共有6名民警在执行公务中光荣牺牲,30名民警病故,235名民警在执行职务中受重(轻)伤。
在国际贸易国内增加值统计的基础上,提出了本国要素国内增加值统计理念,将国内增加值中外国要素创造的增加值剔除,以本国要素国内增加值出口额来度量出口国的贸易利益,并据此
当前,随着我国社会经济文化的快速发展,文化遗产保护事业得到国家及政府的高度重视。大遗址作为我国历史文化遗产的主体,其本身的历史、社会、科学、艺术、文化价值不仅得到政府和学界的高度关注,也引起社会对待传统文化和历史记忆的强烈诉求。因此对其保护与展示成为我国文物保护工作的焦点和重点。而山西作为文物大省,现存大遗址数量众多,但其保护现状堪忧。山西大遗址或是面临城市现代化的毁灭,或是遗弃在荒野被人淡忘。山