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同源二聚体是生物蛋白质较常见的存在形式。两种同源二聚体蛋白可以形成多聚体复合物。可广泛应用于多种领域,其中一个非常重要的应用是可以用作抗原表达平台,用来插入抗原表位,来提高抗原的载量。本研究利用弓形虫的动力蛋白轻链 8a (TgDLC8a)和谷胱甘肽S转移酶(GST)这两个同源二聚体表达形成多聚体复合物,作为一个疫苗表达平台,插入鸡艾美尔球虫的多种抗原片段。以带有GST标签的PGEX-6P-1为载体,通过基因工程技术将TgDLC8a基因克隆至PGEX-6P-1载体上,利用PGEX-6P-1携带的GST蛋白完成与TgDLC8a的融合。为了展示抗原,选取GST与TgDLC8a基因之间的BamHI和对TgDLC8a蛋白空间结构影响较小部位(37-42 bp)两个位置作为抗原的插入位点,构建多聚表达载体TgDLC8a-GST。将柔嫩艾美尔球虫抗原EtMIC2、EtMIC1H的关键结构域克隆到TgDLC8a-GST载体上,利用诱导表达的多价抗原复合物对该表达平台进行评价。TgDLC8a-GST 转 BL21 诱导表达产物经Native-PAGE和Western-blot分析表明,融合的TgDLC8a-GST同源二聚体可以形成多聚体复合物。抗原基因克隆至重组表达载体后均可成功表达并形成蛋白二聚体及多聚体,表明TgDLC8a插入的酶切位点不影响其同源二聚体的形成,该平台可以用于疫苗展示。研究表明TgDLC8a和GST融合成的同源二聚体可以形成多聚复合物。本研究成功构建了重组多聚体表达平台(TgDLC8a-GST),该平台可以高效地以多价态的形式展示抗原,为基因工程疫苗的研发提供了良好平台。 利用鸡球虫感染试验对该重组疫苗株的免疫保护效果进行了探究。140只一日龄雏鸡随机平均分成7组,I、II组为PBS对照组,III、IV、V、VI、VII组动物分别皮下多点免疫TgDLC8a-GST蛋白抗原疫苗、TgDLC8a-GST-MIC2-MIC1H蛋白抗原疫苗、TgDLC8a-GST-MIC2-MIC1H蛋白抗原疫苗(辅助佐剂)、EtMIC2、EtMIC1H混合蛋白抗原疫苗、EtMIC2、EtMIC1H混合蛋白抗原疫苗(辅助佐剂)。21日龄时,对II、III、IV、V、VI、VII组口服接种16000个 E.tenella孢子化卵囊。31日龄时,对结果进行分析。动物试验结果表明,IV、V、VI、VII组蛋白抗原疫苗均能够对球虫的感染提供一定的保护作用,且IV组平台表达疫苗株与VI组比较要有效。