新城疫(ND)是禽类的一种高度接触性、烈性传染病,给许多国家的养禽业带来严重的经济损失。ND的病原为新城疫病毒(NDV),属副黏病毒科腮腺炎病毒属的成员,是一种具有囊膜的RNA病毒,严重地危害着养鸡业的发展。NDV对其宿主感染,对细胞有绝对的依存性。众所周知,病毒对宿主的致病首先是通过感染宿主细胞扩增其数量,再借助宿主的循环系统扩散到其他组织来完成的。由此可见,阻止病毒对宿主细胞的感染至关重要。然而,益生菌对宿主细胞的保护作用恰恰就体现在其干扰了病毒对宿主细胞的感染过程,对病毒增殖传播起到了抑制作用。已经有研究发现以细胞为模型研究益生菌和病毒关系,其结果益生菌可以保护其细胞完整性。但目前关于益生菌的研究大多仅限于对人类病毒研究上,且菌株来源大多为食品类。本研究目的在于从健康仔鸡肠道内内容物内筛选出具有抗NDV活性的益生菌并分析其可能的抗病毒机制。实验中首先运用革兰氏染色、过氧化氢实验初步筛选出61株益生菌；从中快速筛选出具有降低NDV血凝价作用的11株菌株；进而利用MTT法测定益生菌处理后的细胞活性,以及药敏实验筛选出对均高度敏感的抗生素,然后将上述结果进行了细胞上的益生菌及培养上清抗病毒研究筛选出6株抗病毒效果强的菌株。在上述基础上,模拟胃肠道环境进一步检测抗病毒效果。具体实验分组如下：实验分为两个部分：pH2.0、pH3.0、pH4.0、pH6.4酸性环境预处理部分；胆盐浓度为0.1%、0.2%、0.3%预处理部分；这两部分均按下列方法分组测定。第1组：益生菌与CEF细胞预先分别孵育后再攻毒；第2组：益生菌与病毒同时接入CEF细胞；第3组：益生菌对照；第4组：病毒对照；第5组：正常CEF细胞对照。结果显示：在体外益生菌对NDV血凝价影响的实验中,筛选出的11株益生菌均非常显著地降低NDV的血凝价,但菌种间存在差异；其余50株菌株血凝价略有降低或没有变化,这一结果说明益生菌菌株之间有种属差别；在实验中对比选择的2种致病菌对NDV的血凝价均没有产生影响,说明益生菌可能具有直接影响病毒或其血凝素的作用,并且存在菌种差异。以MTT法测定益生菌和NDV处理后的细胞活性,通过公式计算病毒抑制率表明,在CEF细胞上,11株益生菌均有一定抗NDV作用,但是益生菌之间在效果上存在一定的差异性。所以,选择其中抗病毒效果极显著的6株菌进行了种属鉴定。并对其进行了生化试验和16SrRNA鉴定,分别命名为MC1、MC19、T4-唾液乳杆菌Lactobacillus salivarius、T6-戊糖乳杆菌Lactobacillus pensus、T12-肠乳杆菌Lactobacillus intestinal、T14-植物乳杆菌Lactobacillus plantarum。鉴于鸡胃肠道环境变化,实验分别模拟研究了益生菌活菌和培养上清在不同pH值、不同胆盐情况下的抗病毒效果,结果表明,随着pH值的降低抗病毒的抑制率也降低；这可能的原因是其低pH值下菌株活菌数也随之降低,浓度和稀释度都有所下降,这说明益生菌对NDV发挥作用是具有极显著的量效关系；尽管益生菌随着胆盐浓度的升高其变化幅度很小,但也表现为随着胆盐浓度升高其病毒抑制率也随之降低。说明肠道内胆盐浓度可能对益生菌本身影响很小,并不影响发挥其抗病作用；或者胆盐可能刺激细胞的生长和增殖。益生菌先接入细胞后攻毒与益生菌与病毒同时接入细胞均对NDV病毒有抑制作用。提示,益生菌可能对NDV结构具有直接破坏作用或者吸附病毒作用,干扰NDV感染。综上所述,本文筛选出的MC1、MC19、T4、T6、T12、T14菌株,体外显著降低血凝价,并保护细胞防止病毒入侵。并通过模拟胃肠道环境下,发现其益生菌可能在机体发挥作用的机制,为益生菌抗NDV病毒制剂的研发奠定了实验基础。而益生菌对其宿主无毒无副作用应用于NDV防治,无疑为畜禽提供了更好的选择,因此具有极大的研究意义。