论文部分内容阅读
菝葜是一种具有抑菌、抗肿瘤、降血糖、抗氧化、抗炎镇痛等多种功能的药用植物,落新妇苷和绿原酸均是其中重要功能性成分之一。本研究以菝葜为对象,先研究醇提物、石油醚层、氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层、水层的抗氧化和抑菌试验,然后从水层和乙酸乙酯层,分离纯化绿原酸和落新妇苷。试验结果如下:(1)采用滤纸片法、最小抑菌浓度、半数抑菌浓度比较各萃取物的抑菌活性。通过抑菌实验可知:萃取物均有一定的抑菌活性萃取物,抑菌活性大小为:乙酸乙酯相>正丁醇相>水相>醇提物>石油醚相>氯仿相。其中乙酸乙酯相的抑菌效果最好,当其浓度为80 mg/mL时,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌和大肠杆菌抑菌圈分别为13.6±0.12、13.2±0.10、12.9±0.07、12.5±0.01(mm)。(2)以BHT为阳性对照,测定菝葜各萃取层,浓度为0.2-1.2 mg/mL时,清除·OH、·O2-、·DPPH、·ABTS+能力、总抗氧化能力。通过抗氧化实验可知:菝葜提取物均具有不同程度的抗氧化活性且与质量浓度呈量效关系,乙酸乙酯相的抗氧化活性始终最强。不同极性提取物中抗氧化能力大小为:乙酸乙酯相>正丁醇相>水相>醇提物>石油醚相>氯仿相。乙酸乙酯相清除·OH能力稍弱于BHT,而清除·DPPH、·O2-、·ABTS+能力、总抗氧化能力均强于BHT,当浓度为1.2mg/mL,乙酸乙酯相对·OH、·DPPH、·O2-、·ABTS+清除率分别为58.7%、66.7%、73.1%、93.4%,FRAP值为186±0.21。(3)采用微波提取菝葜中绿原酸,通过单因素和响应面试验得到了最佳的工艺条件:乙醇体积分数50%,微波功率300 W,液料比30:1(mL/g),微波时间87 s,微波温度48oC,理论绿原酸得率为9.4565 mg/g,而实际绿原酸得率平均值为9.3972mg/g,相对误差为0.627%。(4)对七种大孔树脂进行筛选,得到最佳树脂S-8,进一步通过动态吸附解吸试验确定其最佳吸附-解析条件为:溶液pH值为2,树脂用量为1.0 g/30mL,解吸液乙醇浓度为50%,上样浓度为80 mg/mL,上样流速控制在1.0 mL/min,洗脱流速1.0mL/min,用量5 BV。收集50%乙醇洗脱液,冷冻干燥得到纯度为76.47%绿原酸,纯化效果较为理想。利用硅胶柱层析对粗提物进行进一步纯化。以乙酸乙酯-甲醇进行梯度洗脱,利用薄层层析,收集、合并具有相同位置的斑点,挥干洗脱剂后得到9.85mg淡黄色固体。通过HPLC、MS、NMR鉴定该物质为绿原酸。(5)选用聚酰胺分离纯化乙酸乙酯层的落新妇苷,工艺条件为:上样浓度为80mg/mL,上样速度为1 m L/min,以速度1 mL/min,50%乙醇洗脱,收集洗脱液,旋转蒸发得到浸膏,重复两次。利用硅胶柱层析对粗提物进行进一步纯化。以氯仿-甲醇进行梯度洗脱,利用薄层层析,收集、合并具有相同位置的斑点,挥干洗脱剂后得到11.41 mg白色固体。通过HPLC、MS、NMR鉴定该物质为落新妇苷。综上得知,菝葜各萃取物均有一定程度的抑菌、抗氧化作用,乙酸乙酯层的抑菌和抗氧化效果始终最强,抑菌抗氧化效果大小均为:乙酸乙酯相>正丁醇相>水相>醇提物>石油醚相>氯仿相。通过联合大孔树脂和硅胶从水层纯化得到绿原酸,联合聚酰胺和硅胶柱层析从乙酸乙酯层纯化得到落新妇苷,且他们的纯度均大于90%。