目的:青光眼是致盲性眼病之一,发病率呈现逐年升高趋势,患者视神经节细胞受到多因素的不可逆损伤,目前治疗青光眼的手段多是降低眼压,但是仍存在未知因素影响青光眼的发生和发展。近年来研究发现血管内皮生长因子B(Vascuar endothelial growth factor B,VEGFB)对视网膜神经节细胞具有保护作用,但具体机制尚不明确。本实验的研究目的是采用量化蛋白质组学研究VEGF-B对青光眼视网膜细胞的保护机制。方法:我们采用视神经夹伤方法构建C57BL/6小鼠青光眼模型,对假手术组小鼠以及造模2天组、造模7天组小鼠的视网膜进行HE染色,验证小鼠青光眼模型造模成功。其次我们利用实时定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)、蛋白免疫印记(Western Blot)及免疫组织化学(Immunohistochemistry)技术确证VEGFB在青光眼模型小鼠视网膜细胞中表达上调。接着采用质谱分析技术,每组各取5只视网膜组织,使用nanoLC与QExactive Plus系统以无标记定量蛋白质组学方法进行分析,筛选出差异表达蛋白。对质谱鉴定数据进行生物信息学深度分析,利用KEGG,GO,IPA,Cytoscape和PANTHER等生物信息学软件,预测VEGFB参与的信号通路。并利用生物学实验方法,通过qRT-PCR、Western Blot、酶联免疫吸附测定法(ELISA)方法在组织水平上验证差异性表达蛋白,在细胞水平上,采用RNAi方法降低神经节细胞(RGC5)中VEGFB的表达,使用xCELLigence实时细胞分析仪RTCA系统检测细胞增殖情况。使用qRT-PCR、We stern Blot和ELISA方法检测相关蛋白表达。结果:通过视神经夹伤方法成功建立C57BL/6小鼠青光眼模型,并且验证VEGFB在青光眼模型视网膜中表达上调。质谱鉴定共检测到1585种蛋白,有48种蛋白在假手术组和青光眼模型组视网膜组织中呈现差异表达,并且具有显著的统计学意义。其中有10种蛋白在青光眼模型视网膜组织中呈现高表达,有20种蛋白呈现低表达。生物信息学分析结果表明V-EGFB影响谷氨酸脱羧酶1(GAD1),精氨基琥珀酸合成酶1(ASS1)的表达,并在组织水平上进行了验证,VEGFB与GAD1和ASS1的表达呈正相关。进一步细胞实验结果显示,敲降VEGFB表达之后,GAD1和ASS1表达下调,并且抑制了细胞的增殖功能。同时VEGFB表达下调降低了细胞中r-氨基丁酸(GABA)的分泌。结论:我们成功建立了青光眼小鼠模型,通过定量蛋白质组学方法检测了假手术组和青光眼模型组小鼠视网膜组织中差异性表达蛋白,通过生物信息学分析揭示了 VEGFB参与调控GAD1和ASS1的表达,并在组织和细胞水平上确证了 V EGFB对GAD1具有显著的正向调控作用,推测VEGFB主要通过受体VEGFR1调控GAD1的表达,影响谷氨酸的代谢,降低谷氨酸对视网膜的毒性,从而起到保护视网膜细胞的作用。