细胞外的许多信息分子，包括激素、细胞因子、药物等需经细胞内的信息分子逐级传递才能进入细胞内，最终引起生物学效应。细胞的生长、分化、凋亡等信号都有其一定的转导途径。凋亡诱导剂需经细胞内的信息分子逐级转导才能将凋亡信号由细胞外转导入细胞内，最终降解DNA，导致细胞凋亡。因此，深入研究细胞凋亡信号的转导途径，不仅对认识细胞凋亡的发生机制有积极意义，而且对认识肿瘤的发病原因及其治疗也有重要意义。 8-溴环腺苷一磷酸(8-bromo-cyclic 3’，5’-adenosine monophosphate，8-Br-cAMP)可通过与蛋白激酶A(PKA)的cAMP受体位点的选择结合，诱导细胞分化、凋亡，抑制恶性肿瘤的生长。槲皮素(quercetin)是广泛分布的植物类黄酮，许多研究表明它可通过抑制蛋白激酶C(PKC)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性来抑制肿瘤细胞的生长。而关于8-Br-cAMP和quercetin诱导Eca-109细胞凋亡的信号转导与凋亡共同通路的关系，和细胞凋亡——过程中细胞胞质内游离钙离于0CaZ勺i）的变动，以及用微阵列 （microarr叫）法显m相关基因Wp 53一、c－myc一、hcf－2一、iNOS－DNA拷贝，和mRN表达情况都尚未见报道。 材料和方法 本实验采用 Eca刁 细胞传代贴壁培养，随机分成三组。实验组 1：加入含 8Er七AMP出r，终浓度为 2 XIO”’mol／L）的全培养液 （含 10％胎牛血清的 DMEM）；实验组 2：加入含 qlercetin（Q，终浓度为 43 nol／L）的全培养液；对照组：加不含 Br和 Q的全培养液。三组细胞同时培养48h，分别提取 3组细胞的 DNA和 RNA并同时制备细胞标本。 应用T栅L法检测细胞凋亡，观察细胞凋亡百分率，应用x‘检验统计学方法对实验数据进行处理；采用细胞免疫化学技术显示CasPase习和 VEGF（血管内皮生长因于）蛋白表达，并按细胞内免疫反应性＊R）强弱和颗粒的多少分级积分，应用 Ridit检验统计学方法对实验数据进行处理；应用流式细胞仪检测细胞的分裂周期；应用共聚焦显微镜观察胞质内＊ 勺；从细胞中分别提取DNA和 RNA，应用 microarr的法检狈 Wp53、c－pc、bclZ及iNOS的基因复制和InRNA表达；应用琼脂糖凝胶电泳检测DNA“梯带”，观察凋亡细胞DNA降解情况。 结果 1．T栅L法检测细胞凋亡：用油镜观察，凋亡细胞染色质呈 2一深紫色，且胞核边缘化，有的染色质碎裂。凋亡百分率分别为：8－Br－cAMP组，45％；quercetin组，42％；对照组，2％。经 x‘检验统计学方法处理，实验组与对照组相比 P川刀 1，存在显著性差异；两实验组相比P川刀5，无显著性差异。 2．细胞免疫化学反应显示：两实验组细胞内Caspase蛋白免疫反应OR）呈明显阳性，胞质内含棕色颗粒，对照组IR很弱，按细胞内免疫反应性强弱积分：8Er七AMP组为 门 75士 25．0，quercetin组为 980士 11．2，对照组为 265士 3．5。经 idit检验统计学方法处理，实验组与对照组相比P们刀1，存在显著性差异；两实验组相比P们刀1，也存在显著性差异，8Er七AMP组免疫反应性强于quercetin组。对照组胞质内有明显棕色颗粒＊R阳性强人两实验组细胞内VEGF蛋白免疫反应性皆很弱，按细胞内免疫反应性强弱积分：8－Br－cAMP组为 410 土 3．6，quercetin组为 425士 4．1，对照组为 1615士 18．2。经 Ridit检验统计学方法处理，实验组与对照组相比Pm刀1，存在显著性差异；两实验组相比P＞0刀5，无显著性差异。 3．流式细胞仪检测结果：细胞周期G丁M期细胞所占比例为：8－Br－cAMP，23．9％；quercetin，25石％；对照组，12厂5％。两实验组细胞G。－M期细胞比例较对照组上升。 4．DNA源脂糖凝胶电泳：8－Br－cAMP和 quercetin皆呈“梯带”，对照组未呈现DN A“梯带”。 3—— 5．应用 microarr叫法显W Wp53、c－myc、bclZ、iNOS基因的复制和表达：两实验组Wp53和iNOS基因信号皆强于对照组；两实验组c－myc－和bclZ－基因信号皆弱于对照组。 6．激光扫描共聚焦显微镜观察胞质内厂ah］i：＊ay］i荧光强度为：quercetin，113．3 8－Br－cAMP，63．3；对照组，59．2。Qllercetin组＊ayh较对照组和 8Er七AMP组明显升高。 结论 l·8Er七删P和 quercetin皆可导致 EcaJ 细胞凋亡率显著升高，并且琼脂糖凝胶电泳皆可呈现DNA“梯带”。 2．8－Br－cAM和 quercetin可上调 Caspase－3表达，下调 VEGF表达。 3·8－Br－c栅禾 querc幻in均可上调 Wp3、oOS基因的扩增和表达，可下调伙上、c－myc基因的扩增和表达。 4．经 8－BrcAMP和 quercetin分别处理的两实验组细胞，quercetin组胞质内［C扩”］i较对照组显著升高，8Er七AW组较对照组未见明显升高。 5．经 8丑f七AMp和 qllCfCCtill分别处理的两组细胞，细胞周期受到干扰，多停滞在G。－M期。 6．以上结