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目的:从mRNA和蛋白质水平检测染色体脆性位点基因WWOX及FHIT在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,并探讨二者的表达与HCC临床病理特征的关系及其意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测44例HCC、相应癌旁肝组织、5例正常肝组织中WWOX mRNA转录剪接体的表达,同时采用Real-time PCR方法检测HCC和癌旁肝组织中WWOX野生型mRNA的表达情况,并分析WWOX mRNA的表达与各临床病理学特征的关系;采用蛋白免疫印迹(Western Blot)和免疫组织化学染色(IHC)方法在蛋白质水平上分别检测了32例HCC、相应癌旁肝组织、5例正常肝组织中WWOX的表达和142例HCC、相应癌旁肝组织、15例正常肝组织中FHIT和WWOX的表达情况以及二者表达的相关性,分析FHIT和WWOX蛋白表达与HCC的临床病理特征之间的关系,探讨其在肝细胞癌发生发展中的作用。结果:1、应用RT-PCR法在HCC中检测到WWOX的异常转录剪接体Variant4,PCR产物测序结果证实为缺失6～8外显子的剪接体。Variant4在HCC中的出现率为70.5%,明显高于癌旁肝组织的38.6%和正常肝组织的40%(P<0.01),其表达在肝硬化和无肝硬化组中有差别(P<0.05)。HCC中还检测到WWOX的异常转录剪接体Variant6,测序结果证实为缺失6～9外显子,第5外显子与变异的6’外显子拼接形成的剪接体。Variant6在HCC中的出现率为72.7%,低于癌旁的81.8%和正常的80%(P<0.05)。这两型异常剪接体的出现与HCC的大小、组织学类型、组织学分级、分化、血管侵犯、包膜破坏、卫星病灶形成等病理特征及HCC患者的性别、AFP水平、复发情况均无关。2、Real-time PCR结果发现,在HCC中并无WWOX野生型mRNA (Variant1)的表达缺失,但其表达较癌旁肝组织明显降低(P<0.01)。随着HCC组织学分级的升高和分化程度的降低,WWOX野生型mRNA的表达量逐步减少(P<0.05),术后复发组WWOX野生型mRNA的表达低于未复发组(P<0.05)。但WWOX野生型mRNA的表达与Variant4、Variant6的出现、HCC患者的性别、年龄以及HCC大小、组织学类型、血管侵犯、包膜破坏、卫星病灶出现等无关(P>0.05)。3、免疫组化结果显示HCC中FHIT和WWOX表达的缺失/下降率分别为68.3%和77.5%,明显低于癌旁肝组织和正常肝组织(P<0.01),二者的表达呈正相关(P<0.01)。随着HCC组织学分级的升高、分化程度的降低,FHIT和WWOX的表达逐步减弱(P<0.05),二者表达还同血管侵犯、包膜破坏、卫星病灶出现、复发等肿瘤恶性表型及AFP水平、组织学类型有关(P<0.05),但与HCC患者的性别、年龄、HBV感染及肝硬化无关(P>0.05)。免疫印迹实验亦证实了HCC中WWOX蛋白的平均表达水平明显低于癌旁肝组织(P<0.01)。结论:1、在HCC中FHIT与WWOX的表达呈明显正相关,二者的表达缺失/下降与肿瘤低分化、侵袭转移及复发等提示不良预后的指标有关。2、WWOX异常转录剪接体Variant4可能为致癌因素致癌作用的一个分子靶点。3、FHIT与WWOX在HCC中的改变或失活可能不是直接由HBV感染所致。4、FHIT与WWOX在HCC中同为肿瘤抑制基因,它们的改变或失活对肿瘤的发生发展起促进作用。