L-精氨酸激活人肝细胞中内源凝血因子Ⅷ的表达

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目的:利用L-精氨酸加入人肝细胞LO2培养基中,观察LO2中内源凝血因子Ⅷ(coagulation factorⅧ,FⅧ)的表达情况,研究L-精氨酸激活LO2中内源FⅧ表达的调控机制。  方法:将LO2分为实验组和对照组,实验组加入L-精氨酸(终浓度为10mmol/L)分别培养24、36、48和60h,对照组用同体积灭菌水取代L-精氨酸培养。用RT-PCR方法检测LO2中人FⅧ基因的转录水平并测序鉴定,一期法检测细胞培养上清液中的人FⅧ促凝活性(FⅧ:C),Western blot分别检测作用24、48h后LO2中人FⅧ基因的表达,免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜观察作用48h后LO2中人FⅧ的表达。  结果:RT-PCR显示,加L-精氨酸培养36、48、60h后,LO2中有人FⅧ mRNA的转录,而对照组未出现人FⅧmRNA的转录;一期法检测各组细胞上清液中人FⅧ:C差异均无统计学意义(P>0.05):Western blot及激光共聚焦均观察到加L-精氨酸培养48h后LO2中出现人FⅧ的表达,而对照组的细胞中均未有人FⅧ的表达。  结论:L-精氨酸可激活人正常肝细胞中内源人FⅧ的表达,其调控的机制有待进一步研究。
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