论文部分内容阅读
目的：广泛的血管内皮细胞的激活、功能障碍和结构损伤是妊娠期高血压疾病发病机理的一个中心环节。内皮细胞分泌的一氧化氮（NO）和内皮素（ET）可作为反映其功能的指标。子痫前期是妊娠期高血压疾病的一种，研究表明，NO和ET的变化与子痫前期的发生密切相关。低分子肝素（LMWH）已经较广泛应用于临床，但对于其非抗凝机制方面的应用，国内外研究较少。本课题用子痫前期患者及正常晚孕妇女的血清与人脐静脉内皮细胞ECV304细胞株在体外共培养，然后用LMWH进行干预治疗，利用实时荧光定量RT-PCR、免疫组化、流式细胞技术等方法，检测内皮细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、ET及细胞周期的变化，旨在为LMWH治疗妊娠期高血压疾病提供实验和理论依据。 方法：研究对象分为两组：子痫前期患者组18例，对照组为正常晚期妊娠妇女12例。两组孕妇于入院后（子痫前期患者于药物治疗前）采空腹肘静脉血5ml，离心后收集血清备用。将人脐静脉内皮细胞株ECV304分3次接种于15个6孔培养板（预先放入经过处理的无菌盖玻片），每3孔加入含20％同一份妇女血清的培养液，在37℃，5％CO2条件下共同孵育48小时后，把用相同血清培养后的ECV304按随机原则给予以下3种处理：两孔加入LMWH，使其终浓度分别为1U／ml和2U／ml；另1孔加入等体积的培养液。继续孵育24小时后，取出盖玻片行免疫组化，检测内皮细胞ET表达的变化，用胰蛋白酶消化法收集内皮细胞，分别运用RT-PCR法及流式细胞术检测内皮细胞eNOS-mRNA的表达与细胞周期的变化。 结果：①子痫前期患者血清培养后，内皮细胞eNOS-mRNA的表达明显降