S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,常缩写成SAM, SAMe或AdoMet)是广泛存在于所有组织和体液中的一种生理活性分子,它作为甲基供体(参与许多化合物如激素,核酸,蛋白质,磷脂以及某些药物的合成)和生理性硫基化合物的前体参与体内重要的生化反应。生物工程法制备SAM主要利用SAM合成酶催化底物L-甲硫氨酸和ATP生成SAM,因此SAM合成酶的获得是生物工程法制备SAM的关键。本论文根据SAM合成酶的获取方式不同作了两部分工作:一从成年大鼠肝脏中初步提取S-腺苷甲硫氨酸合成酶本部分的工作内容是将大鼠鼠肝匀浆液经过盐析→透析→DEAE-Sephacel离子交换等步骤,使大鼠鼠肝SAM合成酶得到初步提取,采用高效液相方法对每步得到的粗酶活力进行测定,为SAM合成酶的进一步纯化和性质研究奠定了基础。二原核表达成年大鼠肝脏S-腺苷甲硫氨酸合成酶本部分的工作内容是构建大鼠鼠肝S-腺苷甲硫氨酸合成酶的基因工程菌,为生物工程法生产S-腺苷甲硫氨酸合成酶奠定基础。应用RT-PCR技术从大鼠鼠肝总RNA中扩增得到S-腺苷甲硫氨酸合成酶cDNA,再将得到的cDNA克隆至表达载体pQE30,然后转化大肠杆菌M15,筛选阳性重组子。SDS-PAGE显示重组菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶亚基分子量约为48k D。采用HPLC进行酶活测定,重组菌酶活比宿主菌明显提高,从而为生物工程法生产S-腺苷甲硫氨酸奠定了基础。