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本试验通过大量的单孢分离和接种鉴定,研究了大豆疫霉菌无性繁殖后代群体毒力遗传与变异,并利用ISSR-PCR分子标记分析了无性繁殖后代群体ISSR指纹与菌株毒力及地理来源的相关性,研究结果如下: 1.大豆疫霉菌1代单游动孢株群体具有丰富的毒力多样性:7个原始菌株的1代单游动孢子分离后代毒力均发生了变异,1代单游动孢株中已无与亲本毒力相同的单游动孢株,变异率高达100%。7个原始菌株中最少的分化出1种毒力公式,最多分化出6种毒力公式,但总的变异趋势是毒力减弱,即与原始菌株相比,1代单游动孢株能克服的抗病基因数量显著减少同时证明7个大豆疫霉菌原始菌株与其1代单游动孢株在毒力上表现较高的变异几率。而来源于单个原始菌株的无性繁殖后代之间的毒力基本保持一致。 2.以大豆疫霉菌Ps-F8.6菌株为实验材料,对ISSR-PCR反应体系中的模板DNA、TaqDNA聚合酶、dNTP和Mg2+的浓度进行了筛选,确定了25μl大豆疫霉菌ISSR-PCR反应体系中模板DNA的用量应在20-30ng;Mg2+浓度为2mM;dNTP浓度为0.15mM;TaqDNA聚合酶用量为1.5U时ISSR-PCR扩增效果最佳。 3.以大豆疫霉菌Ps-F8.6菌株为模板,对已有的12个引物进行筛选,从中选出可产生3条以上明显谱带的引物7个,它们是(AG)10、(AG)8T、(AG)8C、(CA)8G、(AC)8T、(AG)8YT、(GACA)4。 用上述7个引物分析大豆疫霉菌45个1代单游动孢株,共获得41个ISSR标记,其中多态性标记为31个,占75.6%。扩增后标记出的DNA片段的分子量大小的变化范围在100-2000bp之间。 用SPSS11.5软件包对大豆疫霉菌45个1代单游动孢株和疫霉属的其他4个种的DNA扩增结果进行聚类分析,结果表明,在45个1代单游动孢株中,未出现在遗传背景上完全相同的单游动孢株,表现出较高的的遗传多样性。利用7个ISSR引物可清楚地将大豆疫霉菌与疫霉属的其他4个种区别开来,但没有将疫霉属其他4个种明确区分。 4.大豆疫霉菌1代单游动孢株ISSR聚类分组与菌株毒力之间存在一定相关性,但也存在着差异。 大豆疫霉菌1代单游动孢株ISSR聚类分组与菌株来源地之间存在一定相关性,但也存在着不同。