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目的通过研究六君子汤和启膈散乙酸乙酯部位提取物对人食管癌EC-9706细胞增殖、凋亡、分泌细胞因子IL-6、TGF-β1、VEGF及STAT3信号的调控作用,初步探讨健脾和胃法对肿瘤细胞生存的作用机制,为临床应用提供实验依据。方法70%乙醇提取六君子汤和启膈散后,经乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到70%乙醇部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位,经过不同药物浓度(125,250,500,1000μg/ml)作用于EC-9706细胞的筛选,选取乙酸乙酯部位作为有效部位;六君子汤乙酸乙酯部位(6.25~200μg/ml)、启膈散乙酸乙酯部位(12.5~200μg/ml)培养EC-9706细胞48h后,MTT法检测对细胞增殖的抑制情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用激光共聚焦显微镜观察药物作用后细胞形态变化及凋亡小体;ELISA法检测细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤转化生长因子因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)的分泌情况;采用Western Blot法检测细胞中STAT3和p-STAT3的蛋白表达水平。结果1.六君子汤和启膈散乙酸乙酯部位对EC-9706细胞的抑制效果均明显优于70%乙醇部位、正丁醇部位和水部位。2.六君子汤和启膈散乙酸乙酯部位分别作用于EC-9706细胞48 h,OD值均比对照组有不同程度的降低,且抑制率随浓度增高而增高,呈剂量-效应关系(P<0.05)。3.流式细胞术测定细胞凋亡结果显示,六君子汤和启膈散乙酸乙酯部位提取物的低、中、高三个浓度组,凋亡率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.01)。4.ELISA法检测结果显示,在对照组细胞上清中三种因子的含量最多,六君子汤和启膈散乙酸乙酯部位的低中两个浓度均对细胞分泌因子有一定的抑制作用。六君子汤低中浓度组均降低了细胞上清IL-6、TGF-β1、VEGF含量(P<0.01)。启膈散低中浓度组降低了IL-6、TGF-β1含量(P<0.01);与对照组比较,启膈散低浓度组对VEGF的含量有轻微抑制作用,但无统计学差异(P>0.05);中浓度组明显降低了VEGF的含量(P<0.01)。同水平浓度下,启膈散中、低浓度组对IL-6水平的抑制效果优于六君子汤(P<0.01);对VEGF水平的抑制效果,启膈散中浓度组优于六君子汤(P<0.01),而两方低浓度组无显著差异(P>0.05);两方对TGF-β1的水平影响无明显差异(P>0.05)。5.Western Blot结果显示,六君子汤和启膈散乙酸乙酯部位低、中浓度组作用EC-9706细胞48h后,均下调了STAT3和p-STAT3蛋白的表达。结论1.六君子汤和启膈散乙酸乙酯部位提取物能抑制EC-9706细胞的体外增殖,其抑制作用呈剂量-效应关系。2.六君子汤和启膈散乙酸乙酯部位能降低EC-9706细胞上清中IL-6、TGF-β1、VEGF水平。3.六君子汤和启膈散乙酸乙酯部位提取物抑制EC-9706细胞生存的作用机制,可能与刺激肿瘤细胞分泌细胞因子IL-6、TGF-β1、VEGF减少,下调STAT3蛋白的表达、阻断STAT3磷酸化,从而抑制STAT3信号传导有关。