论文部分内容阅读
目的:前列腺癌是泌尿生殖系统的主要恶性肿瘤之一。在欧美前列腺癌是男性最易发生的肿瘤,其死亡率仅次于肺癌。在我国前列腺癌的检出率和发病率呈逐年上升趋势。在前期的研究中发现,RTN4的表达在前列腺癌与正常前列腺组织之间存在差异。但是,RTN4在前列腺癌细胞中的表达及其作用目前尚无研究。本研究通过体外实验探讨浆膜蛋白(Reticulon-4,RTN4)基因对前列腺癌细胞增殖和衰老的影响。方法:(1)采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测RTN4在前列腺癌细胞株PC3,DU145和LNCaP中mRNA和蛋白的表达。(2)通过重组质粒,瞬时转染,将携带RTN4 shRNA和shCon的慢病毒载体转染前列腺癌细胞,建立稳定沉默表达RTN4的细胞株和对照组细胞株,分别用实时荧光定量PCR技术检测前列腺癌细胞中RTN4 mRNA的表达。采用MTT法、平板克隆形成实验、FCM法、PI法和β-半乳糖苷酶(senescence-associated betaga1actosidase,SA-β-Ga1)染色等方法检测细胞的增殖、细胞周期和细胞衰老情况。结果:采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测RTN4在前列腺癌细胞株PC3,DU145和LNCaP中的表达情况。结果显示:RTN4在前列腺癌细胞中均可表达。稳定沉默表RTN4的细胞株构建成功后,采用实时荧光定量PCR技术检测RTN4在前列腺癌细胞中表达情况。结果显示:与scrambled组和空白对照组相比,实验组水平明显降低(P<0.01)。采用MTT法和FCM法检测细胞增殖,结果显示:与scrambled组和空白对照组相比,转染后LV-shRTN4组细胞的增殖力受到抑制,细胞数明显减少,克隆形成能力下降(P<0.01)。采用PI法检测细胞周期变化,结果显示:与scrambled组和空白对照组相比,转染后LV-shRTN4组细胞所含DNA在S期的比例明显增加(P<0.01)。采用β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老变化,结果显示:与scrambled组和空白对照组相比,转染后LV-shRTN4组衰老细胞所占百分数明显增多(P<0.01)。结论:(1)RTN4 mRNA在前列腺癌细胞株PC3,DU145和LNCaP均有表达,提示RTN4可能在前列腺癌的发生发展中发挥作用。(2)沉默表达PC3细胞中RTN4基因,细胞生长受到抑制,可抑制人前列腺癌细胞的增殖力、加速前列腺癌细胞衰老。进一步证实了RTN4可能在PC3发挥作用,RTN4可能成为治疗前列腺癌的新靶点。