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随着心力衰竭和肾功能衰竭发病率不断升高,两种疾病共存时预后显著恶化,并且死亡率极高.心肾综合征(cardiorenal syndrome,CRS)指心脏或肾脏中的一个器官处于急性或慢性功能不全的病理状态,导致另一器官出现急性或慢性功能紊乱.相对于单一器官的功能衰竭,心肾综合征的治疗更加复杂. 肾脏纤维化是肾功能障碍的机制之一,这可能是心肾综合征发生和发展的关键原因.近年来,关于腺苷A2A受体在纤维化疾病中有重要的作用,如腺苷A2A受体参与肺纤维化、肝纤维化、真皮纤维化、心脏纤维化和肾脏纤维化等多种纤维化过程.近来,研究显示当腺苷A2A受体被激活时,可抑制上皮—间质转化,从而抗肾脏纤维化.内皮—间质转化(endothelial-mesenchymal transition,EndMT)是上皮—间质转化的特殊类型.有研究报道螺内酯可通过抑制EndMT减轻肾纤维化.本研究旨在探讨螺内酯是否可能通过上调腺苷 A2A受体,抑制 EndMT,减轻肾纤维化,从而对心肾综合征起保护作用. [方法] 1、模型建立:选用雄性SD大鼠,体重200~220g,随机均分为4组:①空白对照组(control;10只)、②模型组(Iso-treatment;10只)、③低剂量螺内酯组(low-dose SP;10只)、④高剂量螺内酯组(high-dose SP;10只),大鼠皮下注射异丙肾上腺素诱导心力衰竭,24小时后,后两组螺内酯(30 mg/ kg/ d、60 mg/ kg/ d)灌胃给药;对照组给予相同体积的生理盐水,连续21天至造模结束. 2、超声心动图和左心室插管术检测左心功能变化. 3、计算左心室质量指数和肾质量指数. 4、7180全自动生化分析仪检测血液中血清肌酐(SCr). 5、HE染色法和Masson染色法分别检测心肌组织及肾组织病理学改变及纤维化变化程度. 6、ELISA法检测肾组织中collagen Ⅰ及collagen Ⅲ含量. 7、Western blot法和免疫荧光法检测心肌组织和肾组织内CD31、VE-cadherin、α-SMA和vimentin蛋白表达变化;Western blot法检测腺苷A2A受体蛋白表达变化. 8、实时荧光定量 PCR 法检测心肌组织和肾组织中腺苷 A2A受体的 mRNA表达水平. [结果] 1、计算质量指数:模型组中大鼠LVWI和KWI显著高于对照组(P<0.01),体重显著低于对照组(P<0.01).高剂量螺内酯组中大鼠的LVWI、KWI显著低于模型组(P<0.05),体重显著高于模型组(P<0.05). 2、心功能检测:用超声心动图测定结果如下,与对照组中大鼠比较,模型组中 EF、FS显著降低(P<0.01),而LVEDD显著增高(P<0.01).与模型组中大鼠比较,高剂量螺内酯组中大鼠中 EF 和 FS 显著增高,LVEDD 显著降低(P<0.05). 记录大鼠的血流动力学参数如下,模型组中大鼠LVSP、+dP/dtmax和?dP/dtmax显著低于对照组(P<0.01),模型组中大鼠LVEDP显著高于对照组(P<0.01);低剂量螺内酯组中大鼠+dP/dtmax和?dP/dtmax均显著高于模型组(P<0.05),低剂量螺内酯组中大鼠的LVEDP显著低于模型组(P<0.01);高剂量螺内酯组中大鼠的LVSP、+dP/dtmax和?dP/dtmax显著高于模型组(P<0.05),LVEDP显著低于模型组(P<0.05),提示螺内酯可以提高异丙肾上腺素致心力衰竭大鼠的心肌收缩力,改善心脏功能. 3、血清肌酐检测:与对照组中大鼠比较,模型组中SCr显著增高(P<0.05);与模型组中大鼠比较,高剂量螺内酯组SCr显著降低(P<0.05). 4、病理学改变:HE染色检测心脏和肾脏组织形态学改变,与对照组比较,模型组可见心肌组织中间质增生明显,心肌结构排列紊乱;螺内酯组中大鼠心肌间质增生程度比模型组明显减轻,且高剂量螺内酯组中大鼠心肌组织增生程度显著减轻.与对照组比较,模型组可见肾间质纤维组织增生和结构排列紊乱;与模型组比较,螺内酯组中大鼠肾间质增生程度明显减轻,且高剂量螺内酯组中大鼠肾间质增生程度显著减弱. 5、组织纤维化测定:Masson染色检测心脏和肾脏组织纤维化改变,与对照组比较,模型组中可见大面积的蓝色胶原,心肌纤维排列紊乱;螺内酯组中大鼠心肌纤维排列紊乱程度比模型组明显减轻,且高剂量螺内酯组中大鼠心肌纤维排列紊乱程度显著减轻.与对照组比较,模型组中可见肾间质有大面积的蓝色胶原,纤维排列紊乱;螺内酯组中大鼠肾纤维排列紊乱程度比模型组明显减轻,且高剂量螺内酯组中大鼠肾纤维排列紊乱程度显著减轻. ELISA方法检测肾组织中collagen Ⅰ、collagen Ⅲ浓度:模型组高于对照组(P<0.01),高剂量螺内酯组低于模型组(P<0.01).可见,螺内酯改善异丙肾上腺素致心力衰竭大鼠肾纤维化. 6、EndMT相关指标测定:与对照组中大鼠比较,模型组中心肌组织和肾组织中CD31、VE-cadherin蛋白表达均下调(P<0.01),α-SMA、vimentin蛋白表达均上调(P<0.01).螺内酯治疗后 CD31 和 VE-cadherin 蛋白表达均高于模型组(P<0.05),α-SMA、vimentin蛋白表达均低于模型组(P<0.01或P<0.05). 7、心肌组织和肾组织中腺苷A2A受体的表达水平:与对照组中大鼠比较,模型组中腺苷 A2A受体表达水平显著下调(P<0.01);与模型组中大鼠比较,螺内酯组中腺苷A2A受体表达水平显著上调(P<0.01或P<0.05). [结论] 1、螺内酯改善异丙肾上腺素致心力衰竭大鼠的心功能,降低心脏质量指数和肾质量指数,使血清肌酐显著下降,降低肾脏的胶原含量,抑制心肌纤维化和肾纤维化. 2、异丙肾上腺素诱导心力衰竭大鼠中,腺苷A2A受体表达下调,内皮细胞表达内皮标志物减少,间充质标志物增加,而螺内酯能够使腺苷A2A受体表达上调,抑制EndMT. 3、螺内酯改善异丙肾上腺素致心力衰竭大鼠肾脏的保护作用很可能与其上调腺苷A2A受体、抑制肾组织中EndMT的表达等有关,腺苷A2A受体可能为心肾综合征提供新的治疗方向.