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生物大分子是指生物体内由分子量较低的基本结构单位首尾相连形成复杂空间结构,并具有生物活性的多聚化合物。聚-β-羟丁酸(PHB)是一种自然界典型的生物大分子,是一种具有重要经济价值、环保价值的工业原料。 从本实验室分离到一株高产PHB的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescensA2a5中成功克隆得到PHB解聚酶基因phaZ,该基因和Pseudomonas sp.PC17typeⅡPHA operon中的PHA depolymerase基因同源性为96%。根据此基因设计敲除用上下游同源臂,连接在经过修改的pHsh-kana上,得到可以用于敲除P。fluorescens A2a5中PHB解聚酶基因phaZ的质粒pHsh-kanalac(PHB-depH)。 目前研究微生物系统进化主要采用的是16S rDNA构建系统发育树,但是其在厌氧菌的进化研究中往往不尽如人意。还原力调控蛋白(RSP)是一种转录调节因子,目前已在许多严格厌氧细菌和兼性厌氧菌中北发现。它作用于呼吸链,通过检测NADH/NAD+的比例变化,调节NADH脱氢酶的活性。它具有很高的保守性,具有作为分子钟以研究厌氧细菌进化的潜力。 本课题中,选取了51株严格厌氧细菌,分别取得他们的16S rDNA和RSP蛋白序列,同时采用最大似然法(ML)和贝叶斯法(BI)构建系统发生树。分别对比后发现,同一序列下,BI方法略好于ML方法。同一方法下,RSP序列构建的系统发生树较16S rDNA构建的系统发生树能够更好的反映厌氧菌间的进化关系。初步可以认为RSP可以作为分子钟来研究厌氧菌的系统进化。