目的:　　 所谓自噬是指细胞利用溶酶体降解自身成分的过程，被降解成分包括细胞质和细胞器。细胞自噬是一种分解代谢过程，它可以使细胞循环再利用细胞浆内的成分，因此从节省生物能的角度看，细胞自噬是细胞内各种成分重新合成的有效替代途径。根据细胞物质运送到溶酶体途径的不同，自噬可以分为:巨自噬，微自噬，分子伴侣介导的自噬。众多研究显示细胞主要通过自噬途径消化长寿命的蛋白和细胞器，在细胞应激情况下，如饥饿、去除细胞因子等，自噬多数起保护细胞的作用;但在某些特定的情况下，当细胞自噬过度发生时又可导致细胞死亡。所以，自噬对于细胞的存活和死亡起到双刃剑的作用。　　 BAG3是Bcl-2相关抗凋亡家族蛋白的重要成员，BAG3蛋白含有WW结构域，与Bcl-2和Hsp70相互作用的BAG结构域，以及一个具有多个PXXP基序的脯氨酸富含区域，该蛋白主要分布于细胞浆。除骨骼及心肌组织BAG3具有较高表达水平之外，在其它正常组织中BAG3的表达很弱或者不表达;而在一些肿瘤细胞如白血病、实体性肿瘤细胞内BAG3表达水平较高，维持肿瘤细胞的存活。研究证实，重金属（锌、镉）、高温、蛋白酶体抑制剂等应激在转录水平诱导BAG3表达，现证实HSF1、Egrl等转录因子调控BAG3的表达。最近BAG3在自噬中的作用受到极大关注，研究发现BAG3可以和HSPB8、HSP70形成复合物，直接促进错误折叠蛋白（如亨廷顿polyQ、变异SOD1）向聚集体的运输，进而调控错误折叠蛋白和蛋白聚集体的选择性自噬。　　 本实验在已有的研究基础上，利用血清饥饿对细胞产生饥饿影响，观察细胞内BAG3水平的改变，及对细胞生存能力的影响，为进一步理解BAG3在调控细胞生存能力中的作用及分子机制奠定基础。　　 方法:　　 1、培养HEK293、MCF7、FRO、LK87、SKVO3、HepG2细胞;BAG3稳定过表达的HEK293、MCF7、U87细胞;EGFP-LC3B稳定过表达的HEK293细胞;利用脂质体介导转染技术瞬时转染pcDNA3.1、c-Jun、c-Jun(DBD)表达载体或对照。　　 2、应用Real-Time PCR法检测对照组与实验组中BAG3、JunD的mRNA表达变化。　　 3、应用Western Blot法检测对照组与实验组中BAG3、JunD、c-Jun的蛋白表达差异。　　 4、应用Click-iT(R) Nascent RNA Capture试剂盒标记并分离新生mRNA。　　 5、应用染色质免疫沉淀法分析c-Jun与BAG3启动子的相互作用关系。　　 6、应用MTT比色分析法、Hoechst染色、Trypan blue分别检测BAG3对细胞生存能力、凋亡、死亡的影响;应用广谱凋亡抑制剂z-VAD观察凋亡在增殖抑制中的作用。　　 7、应用PI染色、流式细胞技术检测细胞周期变化。　　 8、自噬的检测:应用AO荧光染料染色，观察细胞内酸性泡数量及结构的变化;荧光显微镜观察EGFP-LC3B的分布;Western blot检测LC3由Ⅰ型向Ⅱ型的转变。　　 9、自噬抑制剂3-MA检测自噬在增殖抑制中的作用。　　 结果:　　 1、血清饥饿在多种细胞中下调了BAG3的表达。　　 2、血清饥饿在转录水平通过c-Jun降低BAG3表达。　　 3、BAG3增加血清饥饿抑制细胞增殖的能力。　　 4、BAG3抑制血清饥饿诱导的细胞自噬水平增加程度。　　 5、BAG3增加血清饥饿抑制细胞增殖的能力与自噬关系不大。　　 结论:　　 1、血清饥饿能够通过e-Jun在转录水平下调BAG3的表达。　　 2、BAG3促进饥饿抑制细胞生存的作用。