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本文探讨了黄瓜花叶病毒运动蛋白(CMVMP)与微丝的作用关系及通过作用于微丝对胞间连丝的调控机制。
本文利用大肠杆菌体外表达黄瓜花叶病毒运动蛋白,从包含体中提纯并获得了有一定活性的CMVMP,同时纯化了兔骨骼肌肌动蛋白;利用免疫印迹,共沉淀和荧光观察,证明了CMVMP与肌动蛋白及微丝的结合活性。同时证明它在微丝聚合溶液中能够形成二聚体和聚集体,这种二聚体的形成可能与ATP有关。运用共沉淀结合荧光光度法,电镜,光镜观察证明CMVMP对肌动蛋白聚合过程的影响与CMVMP浓度有关,低浓度CMVMP降低Actin聚合临界浓度,促进聚合;高浓度CMVMP提高Actin聚合的临界浓度,抑制聚合。直接的观察结果显示低浓度CMVMP作用下,呈现的微丝有许多短片段出现,高浓度CMVMP作用下,呈现的微丝基本上呈点状,说明CMVMP不影响Actin成核甚至有助于成核,但抑制微丝的延伸。进一步的观察证明CMVMP对微丝的作用主要是切割作用。这种作用同样与CMVMP作用浓度有关,低浓度CMVMP对微丝的作用不明显而高浓度CMVMP对微丝有明显的切割作用。随着CMVMP反应浓度的增加,在荧光显微镜和电镜下看到的微丝越来越短,在溶液中CMVMP与Actin摩尔比达到1:1以上时微丝均为很小的片断而呈点状结构,观察不到较长的微丝片断;而荧光光度法测定的结果表明,随CMVMP浓度增加而荧光曲线只是稍有下降,说明微丝的总量并未发生明显的变化,因此我们推证看到的短微丝片段主要是由CMVMP的切割效应造成的。CMVMP对微丝的破坏作用可以被稳定微丝的鬼笔环肽所抑制。