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植物内生真菌(endophyte fungi)是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物组织和器官内部或细胞间隙的真菌,因其长期生活在宿主体内,植物内生真菌可以产生与宿主植物相同或相似的代谢产物。菊芋(Helianthus tuberosus)属菊科向日葵属一年生草本植物,有文献报道,菊芋叶片提取物有显著的抑菌效果,说明菊芋植株含有抑菌性成分。本论文首先从菊芋中分离得到23株内生真菌;为了扩大内生真菌的来源,又选择天麻(Gastrodia elata)、白术(Atractylodes macrocephala)、防风(Saposhnikovia Divaricata)三种药用植物,从中分别分离获得7株、9株、6株内生真菌。对在生物活性测定中活性较好的J015、J018、F003、T003四株菌株进行了分子生物学鉴定,它们分别属于根霉属、青霉属、枝顶孢霉属和镰孢霉属。 对所分离的45株内生真菌的发酵液分别用正丁醇、乙酸乙酯萃取,对菌丝体用乙醇热回流提取,共得到3个部位、135个浸膏样品。采用滤纸片法对135个样品的抑菌活性进行测定,结果表明,4种植物内生真菌中具有抗菌活性的菌株所占比例都超过40%,菊芋内生真菌具有抗菌活性的菌株比例最高,达57.1%。 采用铁氰化钾还原法测定了135个样品的总还原力,结果显示所有样品都表现出了一定程度的还原能力,在同等浓度下的乙酸乙酯部位和正丁醇部位的还原力比菌体部位样品要强,其中菊芋内生真菌 J015菌株正丁醇部位的总还原力尤为突出,吸光度值为2.555,略低于阳性对照Vc的吸光度值2.636。清除·OH的活性测定结果显示,135个样品对·OH的清除作用存在较大差异,与对照样品Vc的清除能力(89.73%)相比较,清除率大于70%的有24个样品,占样品总数的18.45%,其中J020乙酸乙酯部位的清除率较高,达到88.67%。 对活性最好的菊芋内生真菌 J015进行了培养基配方和生长条件的优化,初步确定了最佳培养基配方(玉米粉2%、硫酸铵3%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.05%、碳酸钙0.2%、复合维生素B0.05%、维生素E0.1%)和最适生长条件(温度28℃,pH值6.0,转速150r/min)。以最适培养条件培养J015菌株,对其进行抑菌试验和抗氧化实验,结果表明,J015菌株发酵液乙酸乙酯部位对大肠杆菌的抑菌活性明显增强,乙酸乙酯部位总还原力和对?OH的清除率也明显增强。 采用薄层层析、硅胶柱层析和制备薄层等分离方法,对 J015菌株发酵液的正丁醇提取物进行了分离,从中分离得到3个单体化合物,经碳谱和氢谱鉴定为β-谷甾醇、绿原酸、咖啡酸;从其乙酸乙酯提取物中分离得到一个单体化合物,鉴定为木犀草苷。活性测定发现,β-谷甾醇、绿原酸、咖啡酸具有较强的抑菌作用,木犀草苷具有较强的抗氧化活性。