乙烯是一种重要的植物激素,对植物生长发育及果实成熟过程具有重要的调控作用。在拟南芥中研究表明,EBF2基因编码的F-box蛋白,通过泛素/蛋白酶体途径降解乙烯信号转导通路中的重要调控因子EIN3蛋白参与调节植株对乙烯的反应。但因拟南芥的果实发育与成熟特征不明显,故目前在拟南芥中获得的结果并不能阐明EBF2蛋白对番茄等肉质果实发育与成熟的影响。为了揭示EBF2在果实发育及成熟过程中的功能,本研究克隆并鉴定了番茄Sl-EBF2基因,进行了番茄遗传转化研究。主要研究结果如下:(1)采用RT-PCR方法扩增出Sl-EBF2基因。测序结果显示,Sl-EBF2基因全长编码区为1914 bp,编码637个氨基酸序列。亚细胞定位研究显示其定位于细胞核内。(2)采用定量PCR方法对Sl-EBF2基因的表达模式分析表明,Sl-EBF2基因在花中、开花期及果实发育的破色期和后熟期均有较高表达水平。(3)构建了植物超表达载体pCambia1301-EBF2,经PCR和测序验证正确后转化入农杆菌GV3101。(4)采用农杆菌介导的叶盘法转化番茄,在Kan 100 mg/L的筛选压力下获得抗性植株。(5)采用PCR和GUS染色方法对所获得的番茄抗性植株进行转基因鉴定,共获得3株阳性植株,表明目的基因已整合到番茄基因组中。进一步通过半定量RT-PCR分析证实,Sl-EBF2基因在转基因番茄植株中被超量表达。(6)与野生型对照植株的表型比较分析发现,转基因植株表现出生长缓慢,叶片颜色变深,部分果实长期处于黄果状态,用乙烯处理黄果不转红,且果实多呈无籽或少籽等现象。