[背景]抑郁症是一种现代社会常见的精神疾患,多表现为持久的心境低落、思维迟缓、认知功能减退等症状。抑郁症不仅损害患者健康、影响生活质量,而且给家庭、社会造成极大负担。预计到2022年抑郁症将成为全球排名第二位的疾病负担。抑郁症的防治已受到社会及医学界广泛关注。虽然抗抑郁药物是临床治疗抑郁症的主要手段,但具有不可避免的副作用。针刺对机体有良性的调节作用,可以有效改善抑郁症患者临床症状,但是其作用机制尚不明确,有必要深入阐明。慢性应激是抑郁症的主要促发因素。慢性应激可引起机体促炎性细胞因子释放和一系列炎症反应。脑内促炎性细胞因子如白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)大量增高,是诱发机体出现抑郁症状的重要因素。中枢神经炎症反应在抑郁症发病机制中的作用日益受到关注。小胶质细胞(MG)是介导神经炎症的主要效应细胞,其过度活化后会产生大量促炎性细胞因子,从而加重炎症反应。前期研究发现,针刺可以降低慢性应激抑郁大鼠血清促炎性细胞因子水平。本研究在前期工作基础上,研究针刺对慢性应激抑郁大鼠前额叶皮层炎性细胞因子、小胶质细胞活性及小胶质细胞相关TREM2基因的影响,来阐明针刺的抗抑郁作用机制。[目的]本研究采用慢性应激抑郁大鼠模型,观察针刺对慢性应激大鼠行为学、大脑前额叶皮层炎性细胞因子、小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白(Iba-1)及小胶质细胞相关髓系细胞2表达触发受体(TREM2)基因的影响,阐明针刺抗抑郁的作用机制,为针刺治疗抑郁症的临床应用提供科学依据。[方法]1.将32只体重(200±20)g的SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、针刺组和氟西汀组,每组8只。2.慢性应激抑郁大鼠模型制备方法:采用6周慢性不可预知温和应激的方法制备抑郁大鼠模型。每天随机给予动物以下一种刺激:禁食24h、禁水24h、通宵照明12h、频闪2h、束缚2h、夹尾2min、冷水游泳(4℃)5 min,造模持续6周。3.治疗方法:针刺方法:造模6周期间,从第1天开始,每日造模前针刺大鼠百会穴(GV20)、印堂穴(GV29),留针10 min。每日针刺一次,每治疗6天休息1天。给药方法:造模6周期间,氟西汀组在每日造模应激前灌胃给药(10 mg/kg)。4.行为学观察:(1)一般情况:主要观察大鼠的反应快慢、精神状态、毛发柔软光泽度和大便情况等。(2)旷场实验:用于评估大鼠的探索行为和自主活动性,在实验结束后检测。(3)新奇抑制摄食实验:用于观察大鼠在新奇陌生环境下的摄食情况,反映大鼠的焦虑、抑郁行为,在实验结束后进行检测。5.指标检测:(1)采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠前额叶皮层IL-1β、IL-6、IL-4和IL-10的含量。(2)采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测大鼠TREM2基因在前额叶皮层的表达。(3)采用免疫组化法检测前额叶皮层中小胶质细胞标记物Iba-1的表达。6.统计方法:实验结果以均数±标准差(X ± SD)表示。采用单因素方差分析将数据进行统计处理,以P<0.05作为差异有显著性的标准。[结果]1.针刺对大鼠行为学的影响:(1)一般情况:正常组大鼠精神状况良好,动作灵活自如,毛色光泽。模型组大鼠出现情绪低落、少动、大便色暗稀溏、毛发易脱等表现。针刺组和氟西汀组大鼠较为活跃、精神良好、毛发较为蓬松有光泽。(2)旷场实验:与正常组比较,模型组大鼠旷场实验水平跨格次数显著下降(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠水平跨格次数和垂直站立次数明显增多,差异显著有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,氟西汀组大鼠水平跨格次数显著增多,差异有统计学意义(P<0.05);氟西汀组大鼠垂直站立次数有增加的趋势,但差异无显著性(P>0.05);针刺组和氟西汀组相比无显著性差异(P>0.05)。(3)新奇抑制摄食实验:与正常组相比,模型组摄食潜伏期时间显著延长(P<0.05)。与模型组相比,针刺组、氟西汀组摄食潜伏期显著减少(P<0.05)。针刺组和氟西汀组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。2.针刺对大鼠前额叶皮层促炎性细胞因子IL-1β、IL-6含量的影响:(1)与正常组相比,模型组大鼠前额叶皮层IL-1β的含量明显上升,有显著性差异(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠前额叶皮层IL-1β的含量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,氟西汀组大鼠前额叶皮层IL-1β的含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。针刺组和氟西汀组相比无显著性差异(P>0.05)。(2)与正常组相比,模型组大鼠前额叶皮层IL-6的含量显著上升,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠前额叶皮层IL-6的含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,氟西汀组大鼠前额叶皮层IL-6的含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与氟西汀组相比,针刺组大鼠前额叶皮层IL-6含量显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。3.针刺对大鼠前额叶皮层抗炎性细胞因子IL-4、IL-10含量的影响:(1)与正常组相比,模型组大鼠前额叶皮层IL-4的含量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠前额叶皮层IL-4的含量显著上升,差异有统计学意义(P<0.05);模型组和氟西汀组相比无显著性差异(P>0.05);与氟西汀组相比,针刺组大鼠前额叶皮层IL-4的含量显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与正常组比较,模型组前额叶皮层IL-10含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,针刺组和氟西汀组前额叶皮层IL-10含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。针刺组和氟西汀组比较无显著性差异(P>0.05)。4.针刺对大鼠前额叶皮层TREM2基因表达的影响:与正常组比较,模型组大鼠前额叶皮层TREM2基因表达显著下降,有显著性差异(P<0.05);与模型组比较,针刺组和氟西汀组的大鼠前额叶皮层TREM2基因表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。针刺组和氟西汀组比较无显著性差异(P>0.05)。5.针刺对大鼠前额叶皮层小胶质细胞标记物Iba-1的影响:免疫组化结果显示,在大鼠前额叶皮层中的Iba-1免疫阳性细胞的分布较为广泛。正常组大鼠小胶质细胞呈现出向四周伸出多条细枝样的棘突状态,出现的胞体形状较为瘦长,表现为“分枝样”的静息状态;模型组大鼠的小胶质细胞突起减少、变的短粗甚至消失,其胞体形状逐渐变大,活化细胞形态改变为近似圆形,表现为典型的“阿米巴”样;与模型组相比,针刺组和氟西汀组的小胶质细胞的胞体变小,形态趋向静息态。免疫组化图像分析结果显示,与正常组相比,模型组大鼠前额叶皮层Iba-1阳性细胞表达明显上升(P<0.05);与模型组相比,针刺组和氟西汀组大鼠前额叶皮层小胶质细胞Iba-1阳性细胞表达明显下降(P<0.05);针刺组和氟西汀组比较无显著性差异(P>0.05)。[结论]1.慢性应激抑郁大鼠的旷场实验中的水平爬格数和垂直站立次数减少,新奇抑制摄食潜伏期显著延长。针刺治疗可增加旷场实验中的水平跨格数和垂直站立次数,明显缩短摄食潜伏期,改善大鼠抑郁状态,发挥抗抑郁作用。2.慢性应激抑郁大鼠前额叶皮层的促炎性细胞因子IL-1β、IL-6显著升高,抗炎性细胞因子IL-4、IL-10显著降低;前额叶皮层TREM2基因表达下调和小胶质细胞标记物Iba-1表达增加,提示前额叶皮层的小胶质细胞呈现过度活化状态,引起脑内炎症反应。针刺可以显著降低前额叶皮层IL-1β、IL-6含量,升高IL-4、IL-10含量,抑制小胶质细胞过度活化,从而缓解脑内炎症反应,减轻脑组织损伤。3.本实验研究发现,针刺治疗抑郁症的机制之一,为下调前额叶皮层促炎性细胞因子含量,并上调抗炎性细胞因子含量;抑制前额叶皮层小胶质细胞的过度活化,从而缓解脑内炎症反应所造成的脑组织损伤。本实验可以为临床针刺治疗抑郁症提供重要的科学依据。