结核分枝杆菌rbpA基因转录调控研究

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结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)是结核病的病原菌,结核病在全球范围内严重威胁着人类健康,特别是在发展中国家。利福平是重要的一线抗结核药物,其作用靶标是负责基因转录的RNA聚合酶(RNA polymerase,简称RNAP)。研究表明利福平结合在RNAP的β亚基,直接抑制RNA的合成。RNA聚合酶结合蛋白(RbpA)是近年来发现的一个RNAP结合蛋白,它同样作用于RNA聚合酶的β亚基上。之前的研究表明,过表达RbpA可以增强结核分枝杆菌对利福平的耐受,并且RbpA的表达受到利福平的诱导,这些结果都表明RbpA和利福平耐药之间存在着密切的关系,但目前rbpA的转录调控还没有研究。   本研究旨在探讨结核分枝杆菌rbpA基因的转录调控。首先从结核分枝杆菌基因组中扩增出rbpA启动子,并与lacZ基因进行融合,对rbpA启动子转录起始的σ依赖类型进行确证,细菌单杂交实验结果显示rbpA启动子的活性依赖σE;然后扩增了结核分枝杆菌基因组上所有可能编码转录调控蛋白的基因,分别与RpoA蛋白进行融合表达,得到175个调控蛋白在pRAT103中的克隆,初步构建了转录调控蛋白文库。在此基础上利用细菌单杂交对调控蛋白与rbpA启动子之间的相互作用进行酶活测定,确定哪些转录调控蛋白对rbpA的启动子活性有调控作用,初步筛选到6个对rbpA基因转录存在较明显调控作用的蛋白。研究结果为后续系统阐释结核分枝杆菌rbpA的转录调控奠定基础。
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