论文部分内容阅读
第一部分:角膜移植后局部淋巴引流区的实验研究
目的:探讨大鼠角膜移植术后局部淋巴引流的主要区域。
方法:建立大鼠同种异体正位穿透性角膜移植模型，利用免疫组织化学技术检测移植后不同时间点的同侧颌下淋巴结(Submandibularlymphnodes，SMLN)、对侧SMLN、同侧颈浅淋巴结(Superficialcervicallymphnodes，SCLN)及对侧SCLN内树突状细胞(dendriticcells，DC)的数量及ELISA方法检测趋化因子CCL19的表达变化情况，同时分别摘除上述各组淋巴结，分成五组：A组：同种异体正位穿透性角膜移植；B组：同种异体正位穿透性角膜移植+同侧SMLN摘除；C组：同种异体正位穿透性角膜移植+对侧SMLN摘除；D组：同种异体正位穿透性角膜移植+同侧SCLN摘除；E组：同种异体正位穿透性角膜移植+对侧SCLN摘除，观测各组植片存活及排斥情况。
结果:大鼠同种异体角膜移植后不同时间点内，同侧SMLN内趋化因子CCL19的表达持续增强，与之相对应的是DC细胞数量的增加(P＜0.01)，而同侧SCLN及对侧SMLN、SCLN内上述各项指标均无明显变化(P＞0.05)；正常大鼠同种异体正位穿透性角膜移植植片平均存活时间为(8.25±2.43)d，B组植片存活时间为(13.54±1.17)d，明显延长(P＜0.01)，D组植片存活时间缩短(5.07±1.25)d，排斥反应明显提前(P＜0.01)，而C组及E组植片存活时间无明显影响(P＞0.05)，分别为(8.36±1.96)d，(8.59±2.04)d。结论大鼠角膜移植术后颈部淋巴引流的区域主要为同侧SMLN；摘除同侧SMLN后植片存活时间延长，摘除同侧SCLN后排斥反应提前。
第二部分:角膜移植后局部淋巴结内CCL19表达变化及趋化活性的研究
目的:研究大鼠同种异体穿透角膜移植后同侧SMLN内趋化因子CCL19mRNA在不同时相表达的变化及淋巴结组织液对DC的趋化能力变化，探讨趋化因子CCL19在角膜移植中的作用。
方法:分别建立大鼠同种异体正位穿透角膜移植模型及自体原位穿透角膜移植模型，用RT-PCR法分别检测正常角膜0d，同种异体角膜移植及自体角膜移植后1d、3d、5d、7d、10d、14d时的同侧SMLN内趋化因子CCL19mRNA的表达变化；应用免疫组织化学技术检测两种模型在上述时相时同侧SMLN内DC的数量变化，并用Boyden小室观察不同时相淋巴结组织液在有和无抗CCL19抗体下对体外培养DC的趋化能力的变化。
结果:正常淋巴结内CCL19mRNA的表达为0.358±0.072，DC细胞为0.480±0.056；自体角膜移植术后，局部淋巴结内CCL19mRNA的表达及DC的数量均升高，持续至术后第3d(P＜0.05)，以后逐渐恢复至正常水平(P＞0.05)，同种异体角膜移植后，局部淋巴结内CCL19mRNA的表达及DC的数量于术后1～3d与自体移植组无显著性差异(P＞0.05)，以后持续上升至后期显著高于正常组及自体移植组，于7d达高峰(P＜0.01)，分别为2.008±0.124和0.949±0.034，并且不同时相淋巴结组织液对体外培养DC的趋化作用增强(P＜0.05)，这种趋化作用可被抗CCL19抗体所阻断(P＜0.01)，与植片排斥过程基本一致。
结论:正常淋巴结内存在CCL19mRNA的表达和一定量的DC细胞；同种异体角膜移植后，同侧SMLN内CCL19mRNA表达持续增高，促进DC不断迁移进入淋巴结内进行抗原呈递，可能是同种异体角膜移植排斥反应启动与进展的重要因素。
第三部分:角膜移植后抗CCL19抗体延长植片存活的研究
目的:观察局部应用抗CCL19抗体对大鼠同种异体穿透角膜移植植片存活的影响作用。
方法:建立大鼠同种异体正位穿透角膜移植模型，将手术成功者分为A组、B组、C组及对照D组，均于术后立即及第术后3d、5d每只术眼每次球结膜下分别注射1μg/ml、10μg/ml、25μg/ml的抗CCL19抗体0.2ml，对照组(D组)球结膜下注射等量的磷酸缓冲液(PBS)，对植片情况进行评分，观察其效果，并于术后10d，免疫组织化学技术检测同侧SMLN内DC的数量，体外单向混合淋巴细胞培养(mixedlymphocyteresponse，MLR)测定T细胞的增殖反应情况。
结果:各实验组角膜植片平均存活时间分别为(9.17±2.89)d，(15.75±2.01)d，(20.19±1.88)d，对照组(8.29±2.57)d，与对照组平均存活时间相比，1μg/ml组无明显变化(P＞0.05)，而10μg/ml组、25μg/ml组则明显延长植片存活时间(P＜0.01)，且25μg/ml组与10μg/ml组相比差异有显著性(P＜0.01)；同侧SMLN内DC的数量在10μg/ml组、25μg/ml组明显减少(P＜0.01)，分别为0.754±0.027和0.521±0.034，而1μg/ml组及对照组则无明显变化(P＞0.05)，分别为0.947±0.033和0.989±0.042；MLR结果显示：1μg/ml组及对照组淋巴结增殖明显(SI=5.25，4.98)，且二者间无明显差异(P＞0.05)，10μg/ml组、25μg/ml组淋巴结增殖不明显(SI=2.68，1.45)，与对照组相比，差异有显著性(P＜0.01)。
结论:球结膜下注射抗CCL19抗体可抑制角膜移植术后免疫排斥反应，延长植片存活时间，并且剂量越大，效果越好。