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[背景和目的]微小RNA是细胞内源性的18-25个核苷酸长度的非编码小片段RNA家族,通过与其靶基因mRNA的3’UTR互补配对结合,在转录后水平负性调控靶基因的表达。许多研究表明miR-23a在多种肿瘤的发生发展中都扮演重要角色。实验室前期工作证实miR-23a在胃腺癌中表达水平明显升高,并且筛选出了miR-23a的两个候选靶基因IRF1和PPP2R5E。IRF1是干扰素调节因子家族成员之一,在许多细胞中都有组成型表达。IRF1作用广泛,通过调节一系列基因表达水平,来调控细胞生长、凋亡等过程。PPP2R5E是蛋白磷酸酶2A,调节亚基B家族的成员,属于B56亚家族。蛋白磷酸酶2A是四种主要的丝氨酸／苏氨酸磷酸酶之一,参与负性调控细胞的生长和分化。IRF1和PPP2R5E与恶性肿瘤的关系密切,具有抑癌基因活性。本研究的主要目的是探寻在胃腺癌细胞中miR-23a的直接作用靶基因,阐明miR-23a对其靶基因的调控机制以及对胃腺癌细胞增殖和凋亡的影响。[方法]在胃腺癌细胞系中改变miR-23a的表达水平后,应用MTT、集落形成实验和TUNEL实验检测miR-23a对细胞增殖及紫杉醇诱导凋亡的影响。在胃腺癌细胞系MGC803和BGC823中过表达或抑制miR-23a水平后,分别检测IRF1和PPP2R5E在mRNA和蛋白水平上的变化。应用实时定量PCR法检测胃腺癌组织中miR-23a及其候选靶基因的表达水平。应用免疫组织化学的方法检测胃腺癌组织中IRF1和PPP2R5E的表达水平。在胃腺癌细胞系MGC803和BGC823中,分别应用过表达和敲降质粒对IRF1和PPP2R5E进行过表达或抑制后,通过实时定量PCR法和蛋白印迹实验(Western blot)验证质粒有效性。在两种细胞系中过表达或抑制IRF1和PPP2R5E后,应用MTT、细胞集落形成和TUNEL实验检测这两种蛋白对细胞活性、集落形成能力和紫杉醇诱导的细胞凋亡的影响。最后,通过过表达IRF1和PPP2R5E后,检测由miR-23a引起的细胞表型变化是否得到减轻或消除。[结果]在MGC803及BGC823中,miR-23a可以抑制紫杉醇诱导的细胞凋亡并促进细胞增殖。并且miR-23a能够在mRNA水平上负性调控内源性IRF1和PPP2R5E的表达,实时定量PCR结果显示胃腺癌组织中miR-23a较癌旁组织表达上调,而IRF1和PPP2R5E mRNA水平表达下调,二者呈负性关系。免疫组化结果显示与癌旁正常组织相比,IRF1和PPP2R5E在胃癌中低表达。经实时定量PCR法和蛋白印迹实验(Western blot)验证,我们构建的过表达和敲降质粒都是有效的,可以进行下一步的细胞表型实验。随后,细胞功能实验结果显示,IRF1和PPP2R5E能够抑制胃腺癌细胞系MGC803和BGC823细胞的活性、集落形成能力,并能促进细胞凋亡。miR-23a可以促进细胞增殖和抑制细胞凋亡,并且由过表达miR-23a对细胞恶性表型的影响分别能够被过表达IRF1和PPP2R5E所减轻或消除。[结论]在胃腺癌细胞中,miR-23a可以靶定并负性调控IRF1和PPP2R5E的表达,从而抑制胃腺癌细胞凋亡并促进其增殖,在胃腺癌中起到癌基因的作用。