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腹膜透析(peritoneal dialysis, PD)是终末期肾脏疾病(end stage renal disease, ESRD)患者最主要的替代治疗之一,但是长期腹膜透析引起腹膜组织纤维化(peritoneal fibrosis, PF)而导致超滤衰竭(ultrafiltration failure, UFF),限制了腹膜透析的应用。腹膜间皮细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是腹膜纤维化的起始和可逆环节,细胞外基质(extracellular matrix, ECM)沉积是腹膜纤维化的主要组织学改变。研究表明转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-p)在腹膜透析病人腹膜EMT及ECM沉积的过程中起到了关键的作用,并受到多个因素的调控。microRNA是存在于动植物基因组中的功能性非编码小RNA,大多为21-25个核苷酸,可与靶mRNA 3’端非翻译区(untranslated region, UTR)碱基互补配对结合,从而调控相关基因的表达。microRNA广泛参与到生长发育、细胞分化、增殖、凋亡、肿瘤发生等过程中,且与许多疾病,包括EMT相关。研究显示部分microRNA在TGF-β诱导的EMT中调控相关的转录抑制因子如Smad作用蛋白-1 (Smad interacting protein 1, SIP1),或TGF-β的下游结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)等的表达,从而发挥对EMT的调节作用。基于以上分析,我们认为,特定的microRNA参与了调控腹膜间皮细胞EMT及纤维化。为此,本研究开展如下：目的检测腹膜透析患者腹膜透析流出液细胞中1microRNA的表达及EMT发生情况,初步探讨nicroRNA-129-5p与腹膜间皮细胞EMT的关系。方法随机选取新开管持续不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis, CAPD)患者10人,腹透半年以上者12人,分离培养并鉴定流出液细胞；通过micro array得出二者microRNA差异表达谱并用realtime PCR Taqman探针法验证microRNA-129-5p的表达；采取realtime PCR、western blot观察流出液细胞中E-cadherin、claudin1、vimentin、FN的表达。结果腹透流出液细胞为腹膜间皮细胞,不同透龄患者流出液细胞存在形态学改变。透析半年以上组较新开管组33个microRNA表达上调,58个下调,其中microRNA-129-5p在半年以上组中明显下调。半年以上组流出液细胞E-钙黏素(E-cadherin)、claudin 1 mRNA及蛋白表达明显低于新开管组,而波形蛋白(vimentin)及纤维连接蛋白(fibronectin, FN) mRNA及蛋白表达明显高于新开管组。结论腹膜透析患者腹透流出液细胞经证实为HPMC,并表达多个EMT相关的microRNA;随腹透时间延长,microRNA-129-5p表达显著降低同时伴有EMT及ECM沉积,提示microRNA-129-5p可能与腹膜纤维化有关。目的阐明microRNA-129-5p在TGF-β1诱导的HMrSV5细胞EMT及ECM沉积中的作用,以寻找逆转腹膜间皮细胞纤维化的方法方法用5ng／ml TGF-β1刺激HMrSV5细胞,通过realtime PCR及western blot检测细胞中E-cadherin、claudin1、vimentin、FN及microRNA-129-5p的表达；转染microRNA-129-5p的前体(pre-mir-129-5p)及阴性对照pre-miR negative control,再予TGF-p1刺激,通过细胞免疫荧光、realtime PCR及western blot检测HMrSV5细胞E-cadherin、claudin1、vimentin、FN的表达变化。结果5ng／ml TGF-β1刺激后,HMrSV5细胞E-cadherin、claudin1 mRNA及蛋白表达水平呈时间依赖性降低,vimentin、FN mRNA及蛋白表达水平呈时间依赖性升高,microRNA-129-5p呈时间依赖性降低。与TGF-β1刺激组比较,过表达microRNA-129-5p使E-cadherin、claudin1上调,vimentin、FN下调；但转染pre-miR negative control对TGF-β1诱导的HMrSV5细胞E-cadherin、claudin1、vimentin、FN的表达变化无明显影响。结论TGF-β1诱导HMrSV5细胞EMT及ECM沉积；TGF-β1诱导microRNA-129-5p表达下调；上调microRNA-129-5p可逆转HMrSV5细胞EMT,抑制ECM沉积。目的阐明microRNA-129-5p参与调控TGF-β1诱导的HMrSV5细胞EMT和ECM沉积的可能机制,为靶向microRNA-129-5p防治腹膜纤维化提供理论依据。方法用5ng/ml TGF-β1刺激HMrSV5细胞,通过realtime PCR及western blot检测细胞中SIP1的表达；转染pre-mir-129-5p及阴性对照pre-miR negative control,再予TGF-β1刺激,通过细胞免疫荧光、realtime PCR及western blot检测HMrSV5细胞SIP1的表达变化。结果5ng/ml TGF-β1刺激后,HMrSV5细胞SIP1 mRNA及蛋白表达水平呈时间依赖性上调。与TGF-β1刺激组比较,过表达microRNA-129-5p使SIP1蛋白水平下调,而mRNA水平无变化；转染pre-miR negative control对TGF-β1诱导的HMrSV5细胞SIP1的表达变化无明显影响。结论TGF-β1诱导HMrSV5细胞SIP1表达上调；miRNA-129-5p通过转录后水平调节SIP1,影响E-cadherin、claudin1的表达,从而参与TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞EMT及ECM的沉积。