转酮醇酶基因在植物感应AHLs中的功能研究

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革兰氏阴性菌分泌信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(简称AHLs)。它可以自由进出细菌细胞,细菌通过感知信号分子的浓度来监测自身群体密度,使细菌做出相应的反应来进行调控。而植物也可以感知细菌的AHLs信号分子,并产生包括免疫反应在内的应激反应来抵抗病原菌的侵染。本论文通过3H标记的AHLs为探针对拟南芥cDNA文库进行筛选,发现转酮醇酶基因(TK)可能与AHLs相互作用。筛选出基因后就通过两方面来研究在植物感应AHLs中的功能,一方面是构建表达菌株,通过体外表达的蛋白来研究;另一方面是通过突变体与野生型的比较来研究它在植物AHLs中的作用。通过构建表达均菌株,从而得到体外表达的蛋白,通过酶联免疫法(ELISA)证实了转酮醇酶基因的蛋白与信号分子Bio-3OC6-HSL有特异性结合。在植物中,得到tk的突变体,对其进行根长实验和RealTimePCR检测,都证实了TK基因在植物感受信号分子的途径中的重要作用。对TK基因的抗逆性进行研究中,结果表明它在植物抗盐中也起重要作用,而在AHLs和氯化钠共同影响TK的表达的实验表明,TK可以同时参与调控植物感知AHLs和植物的抗逆性。通过比较TK的突变体植株的MAPK的蛋白表达,蛋白磷酸化,以及基因的表达与野生型里MAPK的蛋白表达,蛋白磷酸化,以及基因的表达的异同,确定了TK在感知信号分子的过程中与MAPK途径有关,初步了解TK途径影响植物感受信号分子的机理。
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