目的： 1．探索并改进体外牛眼小梁细胞的培养方法。 2．研究压力对体外培养的牛眼小梁细胞的影响。 3．研究BDNF对体外培养的牛眼小梁细胞的影响。 4．研究BDNF对体外培养的加压条件下的牛眼小梁细胞的影响。 方法： 第一部分：牛眼小梁细胞体外培养的建立 取当地屠宰场1岁以内小牛眼，4℃运至实验室。无菌条件下分离小梁组织，剪成小块，接种于25cm~2培养瓶中；或将分离下来的小梁组织用2ml胰蛋白酶及胶原酶等量混合液孵箱内进行消化，收集细胞以10~4 cell／cm~2接种于50 ml培养瓶。培养液为含20％胎牛血清、100 U／ml青霉素、100 U／ml链霉素和2.5 μg／ml二性霉素B的DMEM。待细胞长满后用0.25％胰蛋白酶消化传代。 第二部分：压力对小梁细胞的影响 传三代牛眼小梁细胞以等量10~4 cell／cm~2接种于10ml培养瓶，约一周即至汇合期，换液并用胶塞塞紧培养瓶口，一注射器通过三通管接4号针头注入无菌空气，三通管另接压力计测量压力，设加压1.33、2.67、5.33、10.67KPa(1 KPa=7.5mmHg)四个实验组，未加压仅紧塞瓶口的细胞组设为对照组，此组压力为0，每组重复6瓶。 第 四 军 医 大 学 硕 士 学位 论 文 第三部分：BDNF对小梁细胞的影响 对传三代小梁细胞的培养液中加有 50 ng／ml 的 BDNF作为实验组，不含BDNF 的空白培养液进行培养的为对照组，测生长曲线；实验组与对照组分别加压 5．33 KPa 与10．67 KPa，作用 24 h。 结果： 1．成功培养出性状良好的牛眼小梁细胞并传代，培养出的牛小梁细胞生长良好，传代后稳定。 2．当作用于细胞的压力为 1．33、2．67 KPa，作用时间为 48 h时，与对照组比较，小梁细胞形态结构无明显变化，台盼兰计数无显著性差异（P＞0．05h而当压力为5．33＊pa，作用时间为24 h时，细胞形态结构有轻度的损伤；压力为5．33 KPa作用48 h或10石7KPa作用 24 h，细胞的损伤程度也进一步加重，甚至出现细胞脱壁死亡。 3．50 ng＊l的BDNF的培养液明显促进传三代的小梁细胞达汇合期。 4．加有 50 ng／ml BDNF培养液后，对于不同压力作用下的体外培养的小梁细胞数量及活性均有保护作用，经统计学检验，有无生长因于组间及不同压力组间均有统计学意义（P＜O．OS）。 结论： 1．消化法与组织块法均成功培养出性状良好的牛眼小梁细胞。较之传统的组织块法，消化法简便易行，可以迅速获得大量供实验用细胞，节约实验时间。 4 第 四 军 医 大 学 硕 土 学 位 论 文 2．小梁细胞承受压力的能力是有限的，压力过高或受压时间过长都会对细胞造成损伤。 3．BDNF有促进正常小梁细胞生长的作用。 4．BDNF能够保护高压情况下小梁细胞的数量及活性，从而能够维持小梁细胞正常生理功能而减轻高服压对眼组织的损害。