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目的：自然杀伤性T细胞（natural killer T cell，NKT细胞）是一类既表达NK细胞表面标志又表达T细胞表面标志的免疫细胞，可以识别由抗原递呈细胞表面的CD1d分子递呈的糖脂类抗原。大量研究表明NKT细胞在抗感染免疫中发挥了重要作用。产单核细胞李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）是一种兼性胞内寄生菌，现已成为研究胞内菌感染机制的重要模型之一。细菌在体内外各种因素的作用下会导致细胞壁缺失，成为细菌L型。本实验室前期的研究表明，与产单核细胞李斯特菌的细菌型相比，其L型在感染小鼠后能够使肝脏和脾脏中NK1.1+NKT细胞的增殖较多，表现出NK1.1+NKT细胞的数量和比例均高于细菌型感染的小鼠。本研究将进一步研究产单核细胞李斯特菌细菌型和L型感染小鼠后，其肝脏和脾脏中NKT细胞分泌IFN-γ的情况。由于NKT细胞在C57BL/6小鼠的NKT细胞上表达NK1.1，而在各系小鼠中均可以表达DX5，所以本研究将通过尾静脉感染分别建立细菌型和L型动物感染模型，使用流式细胞仪检测感染后不同时间点不同感染组中分泌IFN-γ的不同表型NKT细胞的比例及绝对值，探讨细菌L型和细菌型对各种表型的NK1.1+NKT细胞和DX5+NKT细胞的活化能力。方法：1、运用苯唑青霉素纸片法诱导出产单核细胞李斯特菌L型，分别调整细菌型和L型产单核细胞李斯特菌的终浓度为1×106CFU/ml；2、分别用PBS、细菌型和L型产单核细胞李斯特菌0.1ml尾静脉感染C57BL/6小鼠，建立动物感染模型，每组6只；3、分别在感染后第0、1、3天分离小鼠的肝脏和脾脏，采用流式细胞仪检测各组肝脏和脾脏淋巴细胞中不同表型的NKT细胞分泌IFN-γ的情况。结果：1、产单核细胞李斯特菌诱导成为L型后，由革兰阳性转为革兰阴性，并且部分细菌出现多形性。2、在肝脏中，DX5+NKT细胞比例和绝对值在细菌型组和L型组中随着感染时间的延长持续升高，且在感染后的第1天L型组高于细菌型组。NK1.1+NKT细胞的比例和绝对值在感染后第1天升高，第3天较第1天降低，且在感染后的第1天和第3天L型组均高于细菌型组。3、在脾脏中，DX5+NKT细胞和NK1.1+NKT细胞的比例和绝对值在细菌型感染组中随着感染时间的延长持续升高，细胞比例在感染后第1天和第3天L型组高于细菌型组，但是绝对值在感染后第1天L型组高于细菌型组，第3天细菌型组高于L型组。4、在肝脏中，L型细菌感染后，分泌IFN-γ的DX5+NKT细胞的比例和绝对值持续升高，在感染后第1天L型组高于细菌型组。分泌IFN-γ的的CD4+DX5+NKT细胞的比例在L型感染后持续降低，而分泌IFN-γ的的CD4-DX5+NKT细胞的比例L型感染后持续升高，而绝对值在细菌型感染后持续升高，在感染后第1天L型组高于细菌型组，第3天细菌型组高于L型组。5、肝脏中分泌IFN-γ的NK1.1+NKT细胞的比例在细菌型感染组中第1天升高，第3天降低。在感染后第1天和第3天L型组均高于细菌型组。分泌IFN-γ的CD4+NK1.1+NKT细胞的比例在感染后第1天和第3天持续降低，第3天细菌型组高于L型组，分泌IFN-γ的CD4-NK1.1+NKT细胞的比例在感染后第1天和第3天持续升高，第3天L型组高于细菌型组，CD4+NK1.1+NKT细胞的绝对值在感染后持续升高。6、在脾脏中，L型感染后，分泌IFN-γ的DX5+NKT细胞的比例第1天升高，第3天降低。在感染后第1天L型组高于细菌型组。分泌IFN-γ的DX5+NKT细胞的绝对值在细菌型和L型感染组中持续升高，且在感染后第1天和第3天L型组均高于细菌型组。在细菌型感染后，分泌IFN-γ的CD4+DX5+NKT细胞的比例第1天升高第3天降低，在感染后的第3天L型组高于细菌型组。分泌IFN-γ的CD4-DX5+NKT细胞的比例第1天降低第3天升高，在感染后的第3天细菌型组高于L型组。分泌IFN-γ的CD4+DX5+NKT细胞的绝对值在L型感染后持续升高，在感染后的第1天和第3天L型组均高于细菌型组。分泌IFN-γ的CD4-DX5+NKT细胞的绝对值在细菌型和L型感染后持续升高，在感染后第1天L型组高于细菌型组，第3天细菌型组高于L型组。7、脾脏中，分泌IFN-γ的NK1.1+NKT细胞的比例和绝对值在细菌型和L型感染后持续升高，分泌IFN-γ的NK1.1+NKT细胞的比例第1天和第3天L型组均高于细菌型组。分泌IFN-γ的CD4+NK1.1+NKT细胞的比例和绝对值在细菌型和L型感染后持续升高，第1天和第3天L型组均高于细菌型组。分泌IFN-γ的CD4-NK1.1+NKT细胞的比例在细菌型和L型感染后第1天升高，第3天降低，在感染后的第3天分泌IFN-γ的CD4-NK1.1+NKT细胞比例细菌型组高于L型组。结论：1、产单核细胞李斯特菌及其L型感染C57BL/6小鼠后，失去细胞壁的L型，其暴露出细胞膜上的脂类能更有效的活化DX5+NKT细胞和NK1.1+NKT细胞。NK1.1+NKT细胞在感染后可能比DX5+NKT细胞更早地发挥作用。2、产单核细胞李斯特菌L型能更多地活化DX5+NKT细胞和NK1.1+NKT细胞分泌IFN-γ。肝脏中CD4+DX5+NKT细胞和CD4+NK1.1+NKT细胞在细菌感染后表现出不同的变化趋势。DX5+NKT细胞中CD4+DX5+NKT细胞发挥的作用持续增强，而NK1.1+NKT细胞中CD4-NK1.1+NKT细胞的作用持续增强3、脾脏中DX5+NKT细胞在细菌型感染后发挥主要作用的是CD4-DX5+NKT细胞，NK1.1+NKT细胞在细菌型感染后发挥主要作用的是CD4-NK1.1+NKT细胞。