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目的:本文主要探究人趋化因子CCL17和CCL22对淋巴细胞的趋化能力及抗肿瘤功能,从而把CCL17和CCL22与杀伤性免疫细胞联系起来,使具有非限制性肿瘤杀伤的CIK细胞高表达CCL17和CCL22的共同配体CCR4,从而使其能被趋化到肿瘤周围进行免疫杀伤。方法:1、人趋化因子CCL17和CCL22对CD4及CD8两种T淋巴细胞亚群的趋化能力比较研究本节我们重点研究了CCL17和CCL22对CD4和CD8两种T细胞趋化能力上的差别以及对不同T细胞亚群表面CCR4分子内化能力的影响。我们首先运用流式细胞仪分析了健康人外周血PBMC中CCR4+T细胞的分布情况,接着我们利用Mo Flo分选流式细胞仪分选出CD4和CD8T淋巴细胞,进行细胞趋化实验,利用Transwell板,我们检测了不同浓度下,两种趋化因子对CD4和CD8T细胞的趋化效果,我们进一步研究了CCL17和CCL22对CD4和CD8细胞的CCR4受体内化情况。趋化因子结合细胞表面受体后会引起受体分子脱敏而发生内化现象,受体内化的程度和比例决定着受体信号通路的活化。2、CCL17和CCL22对CIK和DC-CIK的受体表达影响本节实验中我们首先检测了CCR4在CIK和DC-CIK细胞上的表达情况,并且做了CCL17和CCL22对CIK和DC-CIK细胞的趋化实验,流式分析DC-CIK和CIK表达的CCR4,推测是DC分泌的CCL17和CCL22致使DC-CIK表面CCR4表达升高,然后测定DC-CIK和CIK细胞的上清中CCL17和CCL22的含量,最后用一定浓度的两种趋化因子作用CIK细胞一段时间,刺激CIK细胞上面表达CCR4。3、转染CCR4的CIK细胞的趋化功能以及对肿瘤的杀伤作用研究本节我们主要做的是把基因CCR4转染到CIK细胞上,使CIK细胞高表达CCR4基因,进而比较转染CCR4的CIK细胞和未转染的CIK细胞的趋化作用和对肿瘤杀伤作用。结果:1、作用于同一受体分子CCR4,浓度为100ng/ml的两种趋化因子趋化CD4和CD8的能力均强于10ng/ml,表明在一定的浓度范围内,浓度越高的趋化因子对细胞的趋化能力越强。在相同趋化时间内,CCL22对CD4和CD8两种T细胞亚群的趋化能力强于CCL17,CCL17和CCL22趋化CD4细胞通过Transwell板的细胞数均多于CD8细胞,但CCL17对两种T细胞亚群趋化能力的差异性要小于CCL22。CCR4受体内化实验证实,相同时间下CCL22比CCL17更容易促使CCR4受体发生内化(P<0.05),对于CD4和CD8两种T细胞亚群,CCL22和CCL17作用后受体CCR4后CD4细胞的内化作用要强于CD8细胞。2、CIK细胞在14天培养过程中CCR4的表达先增多后减少,第四天左右最高,培养时间越长CCR4表达量越来越低,直到最后回收CIK细胞时CCR4几乎不再表达。DC-CIK细胞随着第十天DC细胞的加入直到第十四天回收细胞,这期间CCR4的表达量不仅没有降低反而升高了,原因是由于DC分泌趋化因子CCL22和CCL17导致的CCR4表达增高。在进行细胞免疫治疗时可以加入适当浓度的CCL17和CCL22,促进细胞因子诱导的杀伤细胞CIK表面配体CCR4的表达,而肿瘤细胞周围环境中往往会分泌这两种趋化因子,免疫细胞表面表达的CCR4越多,肿瘤微环境就可以趋化更多的表达CCR4配体的免疫细胞进行肿瘤杀伤。3、把基因CCR4转染到CIK细胞上,使CIK细胞高表达CCR4基因,进而转染CCR4的CIK细胞比未转染的CIK细胞有更强的趋化作用和更强的杀伤作用。对肿瘤的杀伤有重大意义。由于许多肿瘤微环境周围被证明高表达CCL17和CCL22两种趋化因子,所以肿瘤细胞周围的液体环境可以趋化更多的免疫细胞进行杀伤肿瘤,这将对肿瘤的杀伤有重大意义。结论:一定的浓度范围内,浓度越高的趋化因子对细胞的趋化能力越强。CCL22比CCL17更能促进CCR4+T细胞的趋化运动和发生受体内化现象,对于CD4和CD8细胞而言,CCL22和CCL17对CD4细胞的趋化效能和内化能力强于CD8细胞。免疫细胞表面表达的CCR4越多,肿瘤微环境就可以趋化更多的表达CCR4配体的免疫细胞进行肿瘤杀伤。我们的研究就是把CCL17和CCL22与杀伤性免疫细胞联系起来,让这些具有非限制性肿瘤杀伤的CIK细胞高表达CCL17和CCL22的共同配体CCR4,从而使其能被趋化到肿瘤周围进行免疫杀伤而不是像高表达CCR4的Treg细胞那样抑制肿瘤杀伤。