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马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)是严重危害中国马铃薯生产的四种RNA病毒.目前,在马铃薯病毒检测中普遍采用的ELISA法复杂费时,灵敏度低,成本高.有文献报道,可使用传统的RT-PCR方法对马铃薯的叶片和块茎进行病毒检测,但由于操作复杂且成本高,不能满足生产实践中的应用.该实验简化了马铃薯茎和叶片组织的RNA提取方法并摸索出一步法RT-PCR(One-tube RT-PCR)反应体系,从而建立起一套简便有效的马铃薯病毒检测体系.依据上述四种马铃薯病毒序列的保守区域分别设计引物,采用新建立的检测体系对染病的马铃薯进行病毒检测,得到与预期相一致的特异扩增片段.将扩增产物进行克隆、测序,结果与GenBank中登录的病毒序列中相应的核酸序列基本一致,同源性均达到96﹪以上.另外,还利用此检测体系对经浓度梯度稀释的病毒核酸进行检测,以对反应的灵敏度做出初步分析;并用DAS-ELISA法设计实验,将检测结果与该实验所建立的病毒检测体系的检测结果相对照,得到了一致的结果.这些结果都表明,改进后的马铃薯病毒检测体系具有快速、可靠、简便等优点,同时这些工作也为马铃薯块茎的病毒检测等进一步探索奠定了基础.在此基础之上,该实验又尝试应用一步法多重RT-PCR同时进行多种病毒的检测,也得到了很好的结果.为了实现对病毒的定量,该实验又采用了TaqMan实时定量PCR来研究样品中病毒的含量,并将定量检测的结果与通过浓度梯度稀释进行半定量得到的结果对比,一致性良好.这部分工作也为今后对病毒进行定量研究开辟了道路.