一株产大环内酯类抗真菌抗生素菌株的鉴定及发酵工艺优化

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近年来,深部真菌的感染率逐渐提高,对患者的健康和生命造成了很大的威胁,开发高效、安全和低毒的广谱抗真菌药物越来越引起重视。实验室筛选得到一株菌株,其代谢产物能够有效抑制白色念珠菌的生长。本论文对该菌株进行了分类鉴定和发酵工艺的优化,并对其产生的抗真菌物质进行了结构鉴定和体外抑菌活性的研究。经生理生化特性检测发现,该菌株属芽孢杆菌,然后通过16S rRNA序列测定和Genbank数据库比对发现其与Bacillus subtilis strain AU53的同源性为97%,可能为芽孢杆菌属的一个新亚种或新生物型。该菌株已保藏在中国普通微生物保藏管理中心,编号为B. subtilis CGMCC 4140。采用单因素和响应面法优化该菌株的摇瓶发酵工艺,得到最佳发酵条件:初始pH值6.5,接种量8%(v/v),转速200 r/min,装液量40 mL/250 mL,温度28℃,发酵时间36 h;最佳培养基组成(g/L):黄豆饼粉2.77,可溶性淀粉27.2, (NH4)2SO43.73, K2HPO42.0, NaC12.0, MgSO41.0, CaCO30.72, CuSO4 0.02, FeSO40.02, MnSO40.02。发酵液抗生素效价为优化前的15.88倍。随后,本论文进行了发酵生产抗生素的5L发酵罐放大实验研究。选用单因素法优化得到最佳发酵条件:搅拌转速300 r/min,通气量1.5 vvm,发酵液初始pH值6.0,装液量60%(v/v),接种量8%(v/v),发酵时间28 h。发酵液抗生素效价为摇瓶发酵的1.2倍。在此基础上,建立了菌株在5 L发酵罐中的分批发酵动力学模型。最后,对抗真菌物质的结构进行鉴定,发现其为Macrolactin家族结构类似物。该物质对黑曲霉、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌等有较强的抑制作用,并且对人体病源真菌白色念珠菌有良好的抑制作用,抗菌谱广,具有较好的新药开发前景。
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