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为了探讨AMPK信号通路在蛋鸡原代肝细胞脂质代谢中的作用。通过改良原位二步灌流法获得了高活性鸡原代肝细胞,然后参照非酒精性脂肪肝体外建模方法,使用脂肪酸(油酸:棕榈酸为2:1)处理肝细胞建立脂肪变性模型,分为正常肝细胞组(Control组),正常肝细胞+AICAR组(Con+AICAR组),正常肝细胞+Compoud C组(Control+Comp C组),脂肪变性肝细胞组(FFA组),脂肪变性肝细胞+AICAR组(FFA+AICAR组),脂肪变性肝细胞+compound C组(FFA+comp C)六组。用AMPK的激活剂AICAR和抑制剂Compoud C分别对正常肝细胞和脂肪变性肝细胞进行处理,测定各组肝细胞中血脂四项(甘油三酯TG,总胆固醇TC,低密度脂蛋白LDL-ch,高密度脂蛋白HDL-ch)含量,以及AMPK信号通路相关基因和脂质胆固醇相关基因(AMPKαl,LKBI,ACC;FAS,HNF4α,HMGR,PPARα;CPTI,GAPT)mRNA表达量差异。结果如下:1.完善原代蛋鸡肝细胞培养体系,培养的原代鸡肝细胞胞核清晰,培养24 h细胞分化完成,细胞活力指数高。2.成功建立FFA(油酸/棕榈酸)致原代蛋鸡肝细胞脂肪变性模型,可见脂滴面积逐渐增多,析出脂滴量在24h极显著上升(P<0.01)。3.0.5mMAICAR在1.5 h能激活AMPK,且活性最高;而20μM Compoud C在24 h抑制AMPK,且效果最明显。4.与Control组肝细胞组相比,FFA组TC、TG、LDL-ch含量显著上升,HDL-ch含量显著下降(P<0.05);Control+AICAR组和FFA+AICAR组分别与Control组和FFA组比较,TC、TG含量显著下降(P<0.05),而HDL-ch含量上升(P<0.01);Control+Comp C组和FFA+ComC组分别与Control组和FFA组比较,TG、TC、LDL-ch含量有上升趋势,但差异不显著(P>0.05),而HDL-ch含量差异极显著下降(P<0.01)。5.与正常肝细胞相比,脂肪变性肝细胞HMGR、ACC、FAS、GAPT、CPT1、HNF4α和PARα mRNA表达量显著上升(P<0.05)。AMPKαl,LKB1,CPT1的mRNA的表达量显著下降(P<0.05);Control+AICAR组和FFA+AICAR组分别与Control组和FFA组比较,LKBl、AMPKαl、CPT1、HMGR、FAS、PPARα mRNA表达量显著上升(P<0.05),GAPT,HNF4α mRNA表达量显著下降(P<0.05),Control+Comp C组和FFA+ComC组分别与Control组和FFA组比较,LKB1、CPT1、HMGR、FAS、PPARα mRNA表达量显著下降(P<0.05),GAPT,HNF4α mRNA表达量极显著上升(P<0.01)HMGRαmRNA差异不显著(P>0.05),但有下降趋势。结论:油酸/棕榈酸可致使成年蛋鸡肝细胞发生脂肪变性病变;并且通过激活AMPK信号通路相关脂质代谢胆固醇合成基因表达发生改变;AMPK的外源性激活剂和抑制剂可调节AMPK在蛋鸡肝细胞的表达活性,调控脂肪合成胆固醇代谢通路。