猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起一种高度接触性和高致死性传染病,给世界各国的养猪业带来了严重危害。近年来,随着CSFV研究的深入,新型疫苗的研制和先进诊断方法的出现,对控制CSF方面发挥了巨大作用。NS2-3蛋白是CSFV的非结构蛋白,具有很好的免疫优势。本研究从携带猪瘟兔化弱毒(Hog Cholera Lapinized Virus,HCLV)全长基因组c DNA质粒中扩增NS2-3基因的抗原表位集中区基因,扩增长度为789bp,将其命名为NS2-32。将目的片段和表达载体p PICZαC分别经Eco R I和Xba I限制性内切酶双酶切,然后连接转化至大肠杆菌,得到重组表达质粒p PICZαC-NS2-32。经PCR和双酶切鉴定后进行测序鉴定,重组表达质粒p PICZαC-NS2-32经Sac I限制性内切酶单酶切线性化之后,电击转化至P.pastoris工程菌感受态X-33。筛选出高抗性阳性菌株,通过改变温度、培养基p H值、甲醇流加量,摸索诱导表达条件,诱导条件包括:(1)诱导温度为:22℃、24℃、26℃、28℃;(2)诱导p H值为:4.0、5.0、6.0、7.0;(3)甲醇浓度为:0.4%、0.7%。对表达产物进行SDS-PAGE分析,没有出现特异性条带。进一步分析目的蛋白无法表达的可能原因和影响因素,包括密码子的偏嗜性、A+T含量、过度糖基化、甲醇浓度、目的蛋白的降解和蛋白信号肽的影响等,排除了影响目的蛋白表达的条件因素,推测影响目的蛋白表达的关键因素可能是基因自身的特点,即稀有密码子比率高和糖基化位点多,这需要进一步的研究验证。本研究为进一步获得高表达、良好抗原性的蛋白,构建以NS2-3抗原集中区为基础的CSFV检测方法和研制新型疫苗奠定基础。