中性粒细胞胞外陷阱(neutrophil extracellular traps,NETs)是中性粒细胞产生的一种胞外网状结构,在防御病原入侵中起重要作用。NETs在高等脊椎动物中通过捕获和局部高浓度抗菌蛋白(组蛋白、弹性蛋白酶等)杀伤病原菌。在低等脊椎动物如硬骨鱼类中都能观察到NETs现象,但是鱼类NETs的抑菌机制尚不清楚。在本文中,我们研究了组蛋白和弹性蛋白酶在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)NETs抗菌过程中的作用。为此,我们首先从半滑舌鳎中克隆了两种组蛋白(CsH2B和CsH4)和两种弹性蛋白酶(CsEla1和CsEla2)的基因。序列分析表明,CsH2B和CsH4分别具有组蛋白H2B和H4的保守结构域,CsEla1和CsEla2则具有胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶的保守结构域。我们在大肠杆菌中表达、纯化了上述四个半滑舌鳎蛋白,获得了重组蛋白rCsH2B、rCsH4、rCsEla1和rCsEla2。细菌结合实验表明,这四个重组蛋白对革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌均具有广泛的结合能力,且在结合后对其中一些细菌的生长具有显著的抑制作用。免疫荧光显微镜研究发现,CsH2B、CsH4、CsEla1和CsEla2均定位于细胞所分泌的NETs中。抗体封闭实验发现,当用抗CsH2B、CsH4、CsEla1和CsEla2特异性抗体封闭NETs后,NETs的抗微生物作用被显著降低。以上研究结果表明,组蛋白(CsH2B和CsH4)和弹性蛋白酶(CsEla1和CsEla2)是硬骨鱼类NETs的重要组成成分,它们在NETs参与的抗微生物免疫过程中发挥着重要的作用。