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目的:随着淋巴瘤和乳腺癌患者年轻化以及生存率的提高,化疗药物所致医源性损害逐渐得到重视。卵巢是生殖系统中对化疗最为敏感的部位,大剂量、长时间的化疗可破坏卵巢组织,导致卵巢功能早衰。表柔比星作为蒽环类抗生素的代表药物,是女性乳腺癌一线化疗用药。临床发现,应用表柔比星为主的化疗方案6个疗程的乳腺癌患者,出现以闭经为主的卵巢早衰(premature ovarian failure,POF症状的概率为45-83%,而且大概约60%的患者一年后卵巢功能不能完全恢复[1-3]。课题组前期研究证实表柔比星能引起小鼠卵巢功能明显减退,动情周期消失。因此研究探讨表柔比星对人卵巢颗粒细胞的损伤机制,为化疗引起的卵巢早衰治疗提供治疗思路。方法:1、采用Ficoll密度离心法分离、培养人卵巢GCs;2、应用细胞免疫组织化学染色方法检测人卵巢GCs表面特异性受体卵泡激素受体（Follicle-stimulation hormone receptors,FSHR）的表达鉴定GCs;3、将人卵巢GCs与含三个不同浓度表柔比星的完全培养基（G组:0 mg/l、GP1:组0.0125 mg/l、GP2组:0.025mg/l）共同孵育24h后PI单染流式细胞术PI单染检测各药物浓度组人卵巢GCs细胞周期G1、G2期比值的变化;4、收集与含三个不同浓度表柔比星的完全培养基（G组:0 mg/l、GP1:组0.0125 mg/l、GP2组:0.025 mg/l）共同孵育24h后的人卵巢GCs采用western blot,测量三个浓度下人卵巢GCs Gadd45β、Cdc2、cyclinB1蛋白表达的变化。结果:1、人卵巢GCs细胞的鉴定:应用细胞免疫组织化学染色方法鉴定培养分离的细胞,染色部位位于细胞膜,程棕色,染色细胞数>80%,为强阳性,鉴定培养细胞为GCs;2、流式细胞术检测人卵巢GCs细胞周期的变化:从G组到GP2组,位于G1期构成比降低,从（66±1.15）%到（59.5±1.83）%,再到（51.07±1.05）%,G2期的构成比增加,从（4.75±0.45）%到（5.94±0.69）%,再到（8.93±0.81）%,P<0.05,三种不同的浓度产生的结果不完全相同,SNK分析提示各组之间存在显著差异,各组细胞G2期的占比随着药物浓度的升高的变化具有统计学意义,提示,表柔比星等导致GCs G2/M期阻滞,并且,随着药物浓度的增加阻滞越来越明显;3、应用western blot检测人卵巢GCs的周期蛋白以及相关蛋白:目标蛋白CyclinB1、Cdc2、GADD45β的表达从G组到GP2组的表达逐渐增加,灰度值从G组到GP2组的分别为:171716.133±1243.12、170834±637.592、164211.67±182.719（Cyclin B1）,P<0.05,SNK分析提示GP1与G组之间的差异不具有统计学差异,GP2与GP1、G组之间分别存在显著差异,蛋白表达的变化具有统计学意义;152500±1255.930、150293±791.595、139746.33±741.756（Cdc2）,P<0.05,SNK分析提示各组之间存在显著差异,蛋白表达的变化具有统计学意义;195393.33±220.185、189663.33±1343.251、182365±290.184（GADD45β）,P<0.05,SNK分析提示各组之间存在显著差异,蛋白变化的变化具有统计学意义结论:1、提取的细胞的为人卵巢GCs;2、表柔比星作用的人卵巢GCs停留在了G2期;3、表柔比星可能使人卵巢GCs的GADD45β增高从而导致周期蛋白Cyclin B1、Cdc2增高引起了GCs细胞周期G2/M期阻滞。