论文部分内容阅读
多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(polygalacturonase-inhibiting proteins,PGIPs)是内切多聚半乳糖醛酸酶(endo-PG)的抑制剂,当病原真菌侵染植物时,它能与病原真菌分泌的endo-PG专一性结合,一方面延缓病原真菌对植物细胞壁的降解,另一方面间接地影响病原真菌的生长繁殖速度,在抵御真菌病害方面发挥重要作用,同时引发植物的防卫反应。它还与大多数植物抗性基因一样,属于富亮氨酸重复(Leucine-richrepeat,LRR)蛋白超家族。pgip基因在植物抗病育种中已成为一重要的候选基因,其分离鉴定是进行转pgip基因研究的基础。根据蔷薇科植物pgip基因序列保守区域设计两对特异引物,以草莓(Fragaria×ananassa Duch)叶片制备的总DNA和总RNA为模板,采用PCR技术,克隆到了约1,300bp和1,000 bp的DNA和cDNA片段。这两条片段与pMD 18-T载体连接后转化E.coli JM109,对筛选到的阳性克隆进行序列测定与分析结果表明,获得的DNA片段长1,389bp,含一个长度为168bp的内含子,cDNA长1,053 bp。BLAST比对结果表明,克隆到的片段是草莓的pgip基因,命名为Fapgip,GenBank登录号为EU117215和EU117213。该片段含一个长度为999bp的完整开放阅读框,编码332个氨基酸残基组成的蛋白质,具有5个潜在的N-糖基化位点,中心LRR结构域由10个串联的LRRs基序组成。预测该蛋白质分子量为37.1 kDa,等电点为7.67,N端24个氨基酸残基构成的疏水区域为信号肽。序列同源比对结果显示,所克隆的Fapgip基因与蔷薇科其它植物pgip基因核苷酸序列的同源性为75.2～86.5%,推导氨基酸序列的同源性为72.9～87.8%;同源树表明其明显区别于其它pgip基因;进一步的系统进化树分析表明,所克隆的Fapgip(EU117213)除与树莓的pgip(AJ620336)关系较近外,与寿星桃(AY903219)、美洲李(AY883417)和梅(AY903223)等的pgip基因都存在较远的进化关系。