EGF-CP-HA水凝胶促进皮肤创面愈合作用的研究

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目的通过EGF-CP-HA水凝胶(胶原蛋白肽-透明质酸负载表皮生长因子水凝胶)在大鼠全层皮肤缺损伤口模型中的应用来探究其对皮肤伤口愈合作用的影响。方法选取90只SD大鼠,将大鼠编号后随机分为A、B、C、D、E组,每组18只。麻醉后在无菌条件下用直径1.2cm角膜环钻切除大鼠脊柱两侧圆形全层皮皮肤以制备伤口创面动物模型。制作四种水凝胶:HA水凝胶(透明质酸水凝胶)、CP-HA水凝胶(胶原蛋白肽-透明质酸水凝胶)、EGF-HA水凝胶(透明质酸负载表皮生长因子水凝胶)、EGF-CP-HA(胶原蛋白肽-透明质酸负载表皮生长因子水凝胶)。在每组大鼠伤口缺损处分别随机贴敷4种水凝胶治疗,对照组涂抹生理盐水(NS),记录大鼠编号及左右对应的水凝胶种类,然后在伤口上贴敷无菌凡士林纱布,造模当天记作第0天。之后每天观察并记录大鼠伤口及全身情况,每隔3天给伤口拍照,观察并记录创面愈合情况。在术后第3、7、11、14、21、28天每次随机选取一组大鼠,麻醉后取伤口及其周缘1 cm处组织标本,然后处死动物,将标本制作成石蜡组织切片,然后做HE、Masson、免疫组化染色来观察损伤区域不同时间的组织病理变化、胶原纤维分布、VEGF-α、TGF-β1的表达变化。结果1、观察并拍照记录伤口愈合情况,在手术后第12天,EGF-CP-HA组伤口达到愈合标准,其余组未达到愈合标准。与NS组相比,EGF-CP-HA组水凝胶可促进大鼠皮肤伤口愈合速率,缩短伤口愈合时间(P<0.01);2、对大鼠创面剩余面积进行统计,与NS组相比,实验组在手术后3、7、11天伤口创面面积均有不同程度减小,且EGF-CP-HA组创面面积减小比其他组更明显(P<0.01);3、对术后第3、14、21天创面取材做HE染色,可观察到EGF-CP-HA组创面炎性反应相对于NS组较轻,肉芽组织的生成速度、毛细血管及胶原纤维生成较其他组多;4、对术后第3、14、21天创面取材做Masson三色染色,结果显示EGF-CP-HA组胶原纤维较其他组多,排列规则、有序,更接近正常皮肤;5、免疫组化染色结果显示EGF-CP-HA组VEGF-α、TGF-β1表达强度均高于对照组(P<0.05);6、免疫组织化学染色法标记毛细血管数结果显示,EGF-CP-HA组血管数比对照组有明显增加(P<0.01)。结论EGF-CP-HA水凝胶可减轻创面的炎症反应、提高VEGF-α、TGF-β1的表达水平,可明显促进伤口愈合。
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