论文部分内容阅读
目的:1.临床研究客观评价益气固本胶囊治疗小儿哮喘缓解期的临床疗效,为益气固本胶囊在哮喘临床中使用提供科学依据。2.实验研究以ILC2s细胞在过敏性哮喘气道炎症中的作用为研究切入点,探讨益气固本胶囊对ILC2s细胞的抑制作用及具体作用机制。方法:1.临床研究采用分组、对照的研究方法将100例哮喘缓解期患儿分为试验组60例与对照组40例,试验组给予益气固本胶囊治疗,对照组采用非中药治疗,两组治疗疗程为1个月。在治疗结束三个月和半年后各随访1次,客观评价益气固本胶囊在提高哮喘控制有效率和哮喘控制评分,减少哮喘发作次数及改善呼吸道感染的临床疗效。2.实验研究2.1将30只小鼠随机分为Control组、Model组、Dexamethasone组、YQGBC low dose组、YQGBC high dose组,每组6只小鼠。2.2采用腹腔注射OVA和AL（OH）3的混合物致敏,用OVA进行超声雾化激发,建立过敏性哮喘小鼠模型。2.3取各组肺组织进行HE染色,观察细支气管周围炎性细胞的浸润情况。2.4 PAS染色观察各组气道上皮杯状细胞增殖和支气管腔粘液分泌情况。2.5流式细胞术检测各组小鼠BALF和肺组织中的EOS和ILC2s细胞含量。2.6流式细胞术染色定量描述各组肺组织中IL-5+ILC2s和IL-5+ILC2s细胞的百分比。2.7 ELISA和RT-PCR检测分析各组肺组织中IL-4、IL-5和IL-13的分泌含量和m RNA的表达水平。2.8 Western Blot技术分析各组肺组织GATA3、RORA的m RNA和蛋白的表达。2.9 Western Blot技术分析各组肺组织p-IKK和p-NF-κB的蛋白表达。结果:1.临床研究1.1哮喘控制率:治疗结束后,试验组哮喘控制临床总有效率为88%,对照组为80%,试验组优于对照组（p＜0.05）。1.2哮喘发作次数:试验组在治疗结束三个月和半年后,哮喘发作次数分别为1.5±0.72次、1.38±0.49次,治疗前半年哮喘发作次数为2.25±1.02次,治疗结束三个月、半年后与治疗结束前半年相比,哮喘发作次数明显降低（p＜0.05）。对照组治疗结束三个月和半年后,哮喘发作次数分别为1.6±0.62次、1.75±0.79次,治疗前半年哮喘发作次数为2.27±0.82次,治疗结束三个月、半年后与治疗结束前半年相比,哮喘发作次数明显降低（p＜0.05）。组间治疗结束半年后比较,试验组优于对照组（p＜0.05）。1.3呼吸道感染:试验组和对照组在治疗结束半年后,呼吸道感染发作次数较治疗前半年明显降低（p＜0.05）,组间治疗半年后比较,试验组优于对照组（p＜0.05）。试验组和对照组在治疗结束半年后,呼吸道感染天数较治疗前半年明显降低（p＜0.05）,组间治疗半年后比较,试验组优于对照组（p＜0.05）。试验组在治疗结束半年后,平均每月呼吸道单次发病病种等级较治疗前半年降低（p＜0.05）,对照组在降低平均每月呼吸道感染单次病种等级方面未见明显差异（p＞0.05）,组间治疗半年后比较,试验组优于对照组（p＜0.05）。1.4随访有效率:试验组在治疗结束三个月和半年后哮喘随访有效率分别为95%、96%,治疗结束时哮喘有效率为88%。治疗结束后三个月与治疗结束时相比,未见明显差异（p＞0.05）,治疗结束半年后与治疗结束时相比,具有明显差异（p＜0.05）。对照组治疗结束三个月和半年后哮喘随访有效率分别为80%、75%,治疗结束时哮喘有效率为80%,治疗结束三个月和半年后与治疗结束时相比,未见明显差异（p＞0.05）。组间治疗结束半年后比较,试验组优于对照组（p＜0.05）。1.5随访哮喘控制评分:试验组在治疗结束三个月和半年后哮喘控制评分为24.98±2.88、24.98±2.76,治疗结束时哮喘控制评分为24.77±2.63分,治疗结束三个月、半年后与治疗结束时相比,未见明显差异（p＞0.05）。对照组治疗结束三个月和半年后哮喘控制评分为24.05±3.27、23.12±4.30,治疗结束时哮喘控制评分为22.38±4.81,治疗结束三个月后与治疗结束时相比,具有明显差异（p＜0.05）。治疗结束半年后与治疗结束时相比,未见明显差异（p＞0.05）。组间治疗结束半年后比较,试验组优于对照组（p＜0.05）。2.实验研究2.1经OVA和AL（OH）3联合致敏,OVA超声雾化激发,过敏性哮喘小鼠模型出现了打喷嚏、点头呼吸、呼吸急促、烦躁不安等异常行为表现,经益气固本胶囊和地塞米松治疗后上述行为得到改善。2.2在HE和PAS病理染色中,哮喘Model组气管基底膜增厚,粘膜脱落,支气管和肺泡周围有大量炎性细胞、杯状细胞和粘蛋白。经益气固本胶囊和地塞米松治疗后,气管和肺泡周围炎性细胞浸润、杯状细胞增殖和粘液分泌改善,基底膜增厚不同程度减轻,粘膜上皮相对完整。2.3过敏性哮喘小鼠肺和BALF中EOS和ILC2s细胞含量较Control组增高,经益气固本胶囊和地塞米松治疗后,小鼠肺和BALF中EOS和ILC2s细胞数量降低。2.4过敏性哮喘小鼠肺中IL-5+ILC2s和IL-13+ILC2s的百分比较Control组升高,经益气固本胶囊和地塞米松治疗后,IL-5+ILC2s和IL-13+ILC2s的百分比降低。2.5过敏性哮喘小鼠BALF中IL-4、IL-5和IL-13的分泌含量和肺中m RNA的表达较Control组升高,经地塞米松和益气固本胶囊治疗后IL-4、IL-5和IL-13的分泌含量和肺中m RNA的表达降低。2.6过敏性哮喘小鼠肺中GATA3、RORA的m RNA和蛋白表达较Control组增高,经地塞米松和益气固本胶囊治疗后,小鼠肺中GATA3、RORA的m RNA和蛋白表达降低。2.7过敏性哮喘小鼠肺中p-IKK和p-NF-κB的蛋白表达较Control组增高,经地塞米松和益气固本胶囊治疗后,小鼠肺中p-IKK和p-NF-κB的蛋白表达降低。结论:1.益气固本胶囊对于小儿哮喘缓解期具有治疗作用,能够提高哮喘控制率和哮喘控制评分,减少哮喘发作次数,减少呼吸道感染次数和呼吸道感染天数,降低呼吸道感染病种等级,并且安全无不良反应。2.益气固本胶囊可能通过抑制IKK/NF-κB信号轴,降低ILC2s细胞发展调控因子GATA-3和RORA的m RNA和蛋白表达,减少过敏性哮喘小鼠中ILC2s细胞活化的含量,降低肺组织中IL-5+ILC2s和IL-13+ILC2s的百分比和其分泌的细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的分泌含量和m RNA表达,从而发挥抗哮喘气道炎症的作用。