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背景与目的：近年来随着人们生活水平的提高,非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)的患病率逐年增加,成为常见的慢性肝病之一。而NAFLD发生发展机制目前尚未完全明确。近年来的研究发现,微小RNA (microRNA, miRNA)与肝脏疾病关系密切,我们前期发现miR-34a在两种NAFLD模型肝脏中表达均显著上调,提示miR-34a可能在NAFLD发生发展过程中起重要作用。发掘并分析miR-34a的作用靶标,对于揭示该miRNA的具体调节机制有着重要的作用。本研究以定量PCR (qPCR)的方法验证了miR-34a在NAFLD细胞和小鼠模型中的表达情况,并采用RNA干扰(RNAi)技术研究miR-34a在NAFLD中的生物学功能。同时,对所预测的miR-34a作用靶点PPARa进行验证。方法：1、采用游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)诱导L02细胞建立NAFLD细胞模型,用高脂饮食(high fat diet, HFD)喂养C57BL/6小鼠构建NAFLD动物模型,采用qPCR法测定miR-34a在L02细胞及C57BL/6小鼠肝脏中的表达变化；2、通过体外转染niR-34a inhibitor或小鼠尾静脉注射miR-34a基因敲减慢病毒载体的方式来进行功能实验。以油红O染色、HE染色、生化分析探讨miR-34a表达抑制对脂变及炎症程度的影响；3、结合在线数据库进行miR-34a靶基因的预测,并利用Western blot等进行靶蛋白表达量的验证,同时利用荧光素酶报告系统对miR-34a的作用靶序列进行鉴定。进一步运用Western blot、 qPCR等方法观察miR-34a表达变化后其靶标基因PPARa下游脂变相关基因的表达变化；4、进一步运用PPARa siRNA探讨PPARa表达抑制对离体肝细胞脂变程度的影响,运用Western blot. qPCR等方法观察PPARa表达变化后其下游脂变相关基因的表达变化。结果：1、在NAFLD细胞和小鼠肝组织中miR-34a的表达水平显著上调；2、通过对L02细胞转染miR-34a inhibitor或小鼠尾静脉注射miR-34a基因敲减慢病毒载体抑制miR-34a的表达,L02细胞胞浆及肝脏组织中脂滴沉积的程度得到显著改善,甘油三酯的含量明显下降,小鼠肝重/体重比值显著下降,小鼠血清中AST水平显著降低；3、采用在线数据库预测发现PPARa是miR-34a可能的调控靶基因。我们在L02细胞及C57BL/6小鼠中检测到PPARa在miR-34a表达抑制后其基因及蛋白水平均有上调。进一步荧光素酶报告系统分析证实PPARa是miR-34a的直接作用靶点,其3’-UTR中存在miR-34a调控的作用序列. PPARa的下游脂变相关基因的表达随着PPARa的改变而改变。另外,通过抑制miR-34a的表达后,可以激活能量代谢通路上关键蛋白AMPK的表达；4、通过对细胞转染PPARa siRNA抑制细胞中PPARa的表达,可以使细胞胞浆中脂滴沉积的程度明显加重,甘油三酯的含量也显著升高,PPARa的下游脂变相关基因的表达随着PPARa的改变而改变。结论：miR-34a的表达与NAFLD密切相关,miR-34a的表达上调参与NAFLD的脂质代谢过程,miR-34a可能通过靶向PPARa成为NAFLD的潜在治疗靶点。