石油降解菌的筛选及生物学特性研究

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随着石油工业的发展,石油污染问题日益严重。目前微生物法成为处理石油污染的重要手段之一,具有广泛的应用前景。微生物法存在的问题之一是缺少稳定及适应性强的菌株。本论文选取被石油污染的土样,通过系统的富集筛选分离,获得纯种石油降解菌株,并对分离的菌株进行了微生物形态学观察、16S rDNA序列分析、降解性能研究及石油烃分解代谢基因的PCR检测,以期为处理石油污染废水及修复石油污染土壤的实际应用提供相关理论依据和基础。从石油污染土壤样品经富集筛选、分离纯化得到了36株具有石油降解能力的菌株。进一步分析发现其中8株具有较明显的石油降解能力,分别为KB1、2182、1217、122、1241、1321、2352、2323。选择其中降解能力和生长较好的KB1菌株,进行了系统研究。结果表明KB1菌落呈圆形,表面光滑且不透明,纵剖面低凸起,边缘规整,颜色为浅黄色;革兰氏染色为阳性,无芽孢,综合形态学观察、16S rDNA序列分析鉴定KB1为红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)。对KB1生长特征研究发现其在0-4h为停滞期,该期内细菌生长缓慢,4-32h达到对数生长期,菌体数量成对数增加,32-64h为稳定期,细胞的生长速率与死亡速率达到动态平衡,64h之后菌体的生长进入衰亡期。采用紫外分光光度法测得KB13d后对原油的降解率高达36.67%。根据微生物降解石油烃的主要代谢相关基因烷烃单氧酶(alkB1、alkB2)、萘双加氧酶(ndoB)、甲苯双加氧酶(todC1)、邻苯二酚双加氧酶(cat23)及联苯双加氧酶(bphA1)基因序列设计特异性引物,用PCR扩增方法从KB1中扩增出石油降解相关基因alkB1、alkB2和bphA1。
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