结核病（Tuberculosis, TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的传染性疾病。近年来,由于多耐药性（multi-drug resistant, MDR）菌株的出现和HIV（Human Immuno deficiency Virus）的协同作用,使得结核病卷土重来,成为当今世界三大传染病之一。乙胺丁醇（Ethambutol,EMB）是抗结核的一线药物之一,对体外培养的结核分枝杆菌的生长有抑制作用。据报道,EMB作用于阿拉伯糖基转移酶,抑制细胞壁的合成。但是,也有研究表明,EMB的作用位点并不是单一的,有可能对细胞壁的其它成分产生影响。为了进一步寻找EMB对结核分枝杆菌的作用靶点,本研究利用生物信息学方法,对EMB作用结核分枝杆菌的基因芯片数据进行系统分析,发现一组与EMB作用相关的基因,其中Rv3717基因在EMB作用于结核分支杆菌后,表达上调。Rv3717在耻垢分枝杆菌中的同源蛋白是MSMEG₆281。为了明确该基因的生物学功能,我们利用结核分枝杆菌模式菌耻垢分枝杆菌（M.smegmatis mc²155,简称mc²155）,研究MSMEG₆281的高表达对细胞形态学的影响,从而为确定该基因的功能提供前期实验根据。目的:1.探索EMB对耻垢分枝杆菌mc²155作用后细胞生长形态学可能产生的变化。2.确认EMB对MSMEG₆281基因的正调控作用。3.当MSMEG₆281高表达后,发现细胞的生长速度及形态可能发生的变化,以推测该基因与细胞壁多糖的相关性。方法:1.分光光度法检测EMB对mc²155生长速度的影响;扫描电镜观察EMB对mc²155形态学的影响。2. RT-PCR方法检测MSMEG₆281基因在EMB处理mc²155不同时间后在mRNA水平表达的变化。3.构建克隆载体pMD18-MSMEG₆281和表达载体pVV16- MSMEG₆281;将表达载体转化到mc²155中;用SDS-PAGE和Western Blotting方法检测融合蛋白的表达。4.观察MSMEG₆281的高表达对mc²155细胞生长速度的影响。5.扫描电镜观察MSMEG₆281的稳定表达对mc²155细胞形态影响。结果:1. EMB作用于mc²155后,细胞生长速度变慢;通过扫描电镜观察到EMB使mc²155细胞变粗、变短,表面变粗糙。2. mc²155经EMB处理,与对照组相比,RT-PCR结果显示,MSMEG 6281的mRNA表达明显上调。3.构建了无突变的pMD18-MSMGE₆281克隆载体和pVV16- MSMGE 6281表达载体; SDS-PAGE ,和Western Blotting结果显示,MSMEG₆281在mc²155中高表达。4. MSMGE₆281在mc²155细胞中的高表达可使细胞生长速度变慢。5. MSMGE₆281高表达的菌株,在对数生长期细胞普遍相对变长,而在静止期在一定程度上使细胞变短、变粗。结论:1. EMB作用于mc²155后,抑制细胞生长,并使细胞形态发生改变。2. EMB刺激可使MSMEG₆281在mc²155中在mRNA水平表达呈上调趋势。3. MSMGE₆281基因在mc²155中的高表达表现可在一定程度上抑制mc²155的生长。4. MSMGE₆281在mc²155中的高表达在一定程度上可改变细胞形态,在mc²155生长中发挥重要作用。