柳叶蜡梅成分测定及降血脂药效探讨

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目的:  ①建立GC测定柳叶蜡梅(LYLM)挥发油中桉油精含量、HPLC测定槲皮素和山奈酚含量的方法,考察总黄酮和总多糖的提取工艺,同时测定鞣质、蛋白质、脂肪、水分和灰分含量,为柳叶蜡梅成分分析和质量控制提供参考。  ②用现代中药药理学研究技术揭示民间柳叶蜡梅用于降血脂的科学内涵。  方法:  ①提取挥发油,利用GC测定不同储存时间的挥发油及其中桉油精含量;  ②考察总黄酮的最佳提取工艺,三氯化铝显色法测定含量;  ③考察槲皮素和山奈酚的最佳提取工艺,应用HPLC测其含量;  ④考察总多糖的最佳提取工艺,苯酚-浓硫酸法测含量;  ⑤没食子酸法测鞣质含量、凯氏定氮法测蛋白质含量、索氏抽提法测游离脂肪含量、酸水解法测总脂肪含量;  ⑥蒸馏法测定水分含量、灼烧法测灰分含量;  ⑦柳叶蜡梅对蛋黄乳剂致高脂血症小鼠血脂水平的影响:预防性给药8天后,蛋黄乳剂急性造模,摘眼球取血,依法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。  ⑧柳叶蜡梅对高脂饲料致高脂血症大鼠血脂水平的影响:采用高脂饲料连续饲养15天,建立高脂血症SD大鼠模型。造模成功后,灌胃给予柳叶腊梅提取物,连续60天。眼眶取血,定期(第15、45天)检测血清血脂四项水平,最后测定血流变指标。  结果:  ①存储0、4、12个月的挥发油含量分别为2.30、2.00、1.75mL/100g; GC方法学考察的精密度、稳定性、重复性,RSD均小于2.0%,平均回收率99.50%(RSD1.7%);随着保存时间的推移,挥发油中桉油精含量由54.30%升至62%左右。  ②总黄酮的最佳提取工艺为:冷凝加热回流提取;溶剂乙醇浓度50%;提取1.5h;固液比1∶10;提取2次测得含量为2.6%;  ③槲皮素和山奈酚的最佳提取工艺为:不脱色;甲醇∶25%盐酸(溶剂)=3∶1;固液比1∶25;提取50min; HPLC方法学考察精密度、稳定性、重复性,RSD均小于4.0%,槲皮素和山奈酚平均加样回收率分别为97.81%(RSD3.29%)、90.01%(RSD2.38%);测得槲皮素和山奈酚平均含量分别为0.118%、0.147%;  ④总多糖的最佳提取工艺为:提取2h;醇沉浓度90%;固液比1∶25;提取3次测得含量为5.08%;  ⑤鞣质含量0.563g/100g,蛋白质含量9.34g/100g,游离脂肪含量2.45g/100g,总脂肪含量7.095g/100g;  ⑥保存0个月、6个月、12个月的药材水分含量分别为:9.0、9.5、10.6mL/100g,灰分含量分别为:8.082、8.026、8.216g/100g;  ⑦柳叶蜡梅对蛋黄乳剂致高脂血症小鼠血脂水平的影响:与正常对照组比较,模型对照组大鼠的血清TC、TG、LDL-c水平及LDL-c/HDL-c、TC/HDL-c比值均显著升高(P<0.01),且HDL-c显著降低(P<0.05);与模型对照组比较,LYLM各给药组血清TC、TG、LDL-c水平及LDL-c/HDL-c、TC/HDL-c比值均降低或有降低趋势,尤其是三个剂量组血清TC和TC/HDL-c比值均显著降低(P<0.05或P<0.01)。柳叶蜡梅0.5g/kg、4g/kg剂量的降脂效果较2g/kg剂量为好。  ⑧柳叶蜡梅对高脂饲料致高脂血症大鼠血脂水平的影响:与正常对照组比较,模型对照组大鼠的血清TC、TG、LDL-c水平和全血粘度30/s、全血粘度3/s、卡松粘度和红细胞压积均显著升高(P<0.05或P<0.01),血浆粘度有升高趋势;与模型对照组比较,给药15天后LYLM0.5g/kg剂量组大鼠的血清TG水平显著下降(P<0.05),给药45天后LYLM0.5g/kg、4g/kg剂量组大鼠的血清TC、TG、LDL-c水平下降明显(P<0.05或P<0.01),给药60天后LYLM4g/kg剂量组大鼠全血粘度200/s、30/s、3/s、红细胞压积均显著下降(P<0.01),LYLM各剂量组大鼠血液的血浆粘度、红细胞压积和卡松粘度有不同程度的下降(P<0.05或P<0.01),其中0.5g/kg和4g/kg剂量组的差异较显著。  结论:  ①贮存时间对柳叶蜡梅挥发油及其中桉油精、水分、灰分含量均具有一定影响,优化后的总黄酮、总多糖、槲皮素和山奈酚含量测定方法简单高效,建立的GC测定桉油精含量、HPLC测定槲皮素和山奈酚含量方法准确可靠、专属性强,可为柳叶蜡梅成分分析和质量控制提供参考。  ②LYLM提取物可显著降低蛋黄乳剂腹腔注射所致急性高脂血症模型小鼠的血脂水平,初步提示柳叶腊梅水提物具有降脂作用。  ③LYLM水提物可显著降低高脂饲料长期喂养所致的高脂血症模型大鼠的血脂水平并改善血流变,进一步提示柳叶腊梅水提物具有降血脂的作用。
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