背景在女性常见肿瘤中乳腺癌是主要的癌症类型,在与癌症相关的死亡率中由于乳腺癌所导致的死亡也是占主要原因的^[1,2]。现在,我们虽然已经在乳腺癌治疗方面取得很大的突破,并且已经极大的提高了患者的生存率,但总体来说我们仍需要提升对乳腺癌的治疗方法^[3,4]。总体来看,现在临床上常用的方法,像是化学疗法,可能会在患者的治疗过程中引起严重的副作用,从而对患者的身体跟精神造成极大的创伤,从而影响患者的生活质量跟生存率。因此,想要降低乳腺癌的死亡率,提高乳腺癌患者的生活质量就寻找治疗乳腺癌的新途径。现如今,天然膳食产品已被广泛普及。已经有临床研究提示我们,有些药品在治疗肿瘤及癌症方面具有巨大应用价值^[5]。近年来,在槐耳中提取出来的物质因其被发现具有抑制肿瘤^[6],杀灭寄生虫^[7]和免疫调节^[8]等众多特性而越来越被重视。现在已经有研究证明槐耳中提取出来的物质是通过诱导细胞凋亡蛋白酶依赖的细胞凋亡,抑制雌激素受体α途径和抑制乳腺癌血管生成而发挥强大的抗增殖作用^[9-11]。但是,现在还不清楚槐耳提取物能否引发其他形式的细胞死亡,比如说自噬。自噬是一种分解代谢的过程,在这个过程中,细胞可以降解长寿蛋白质和受损的细胞器,其中包括高尔基体、内质网和线粒体^[12]。部分研究表明自噬不仅是一种生存反应,也是肿瘤细胞自杀^[13]的重要机制,并且已有研究提示我们诱导细胞自噬在未来是一种极有潜力的用来对抗癌症的新策略^[14,15]。研究目的中药槐耳已经上千年的使用历史,随着我国生活水平、医疗水平的提高,乳腺癌作为女性发病率第一位的肿瘤,给我国医疗事业造成的负担越来越重。手术、化疗虽然作为乳腺癌的一线治疗,但给病人带来的创伤及负担也及其严重,故中医中药因其低廉的价格及较小的副作用在癌症治疗中的运用越来越受到国际民生的关注。本研究主要目的在于探究中药槐耳提取物对乳腺癌相关的细胞系的抑制效果及作用机制,为乳腺癌的中药治疗进行初步的机制探索。实验方法及结果本课题组搜集关于槐耳在各种肿瘤中应用的相关研究,为探究槐耳是否对乳腺癌细胞系有抑制作用及作用机制如何,我们从多方面进行了槐耳对乳腺癌的体外试验。首先我们使用CCK-8实验探究槐耳提取物对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖抑制作用并确定槐耳提取物对乳腺癌细胞系的半抑制浓度IC50。流式细胞术检测槐耳对乳腺癌细胞凋亡的影响。Transwell实验验证槐耳对乳腺癌的侵袭转移能力的影响。我们发现槐耳能抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的增殖跟侵袭能力,并且能够促进癌细胞的凋亡。GFP-mRFP-LC3双标慢病毒对自噬流的显像为证明自噬的金标准,本实验通过给乳腺癌细胞转染该工具病毒,共聚焦显微镜技术观察到槐耳可以显著激活对乳腺细胞的自噬水平。通过蛋白免疫印迹方法,我们提取槐耳处理48小时的乳腺癌细胞系的蛋白质,与对照组相比,槐耳处理后的乳腺癌细胞出现了mTOR信号通路的显著下调,这也对应了自噬流的增加。结论槐耳可以通过抑制mTOR信号通路从多方面抑制乳腺癌细胞的增殖与侵袭,并能激活自噬水平。故我们的研究表明槐耳可能是一种潜在的乳腺癌中草药治疗药物。