三七总皂甙对脂肪变性L02肝细胞SREBP-1c mRNA表达的影响

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目的:观察三七总皂甙(PNS)对脂肪变性L02肝细胞SREBP-1c mRNA表达的影响,探讨其对脂变肝细胞的降脂作用和机理。方法:1.用含50%的小牛血清复制L02肝细胞脂肪变性模型,用油红O染色观察肝细胞脂滴积聚情况;全自动生化分析仪检测上清中ALT、AST、ALP、LDH水平及肝细胞中TG含量。2.采用MTT法测定PNS作用于脂肪变性肝细胞的适宜浓度。3.用含50%小牛血清的培养基造模48h,后分为4组:模型组、自然恢复组、PNS高浓度组(50μg/mL)、PNS低浓度组(10μg/mL),并设正常组作对照。分24h、48h两个治疗时间段,全自动生化分析仪检测肝细胞内TG含量,油红O染色观察肝细胞脂滴积聚情况。4.RT-PCR法检测治疗24h时各组肝细胞内SREBP-1c mRNA的表达情况。结果:1.与正常组比较,造模24h、48h、72h时肝细胞内TG含量升高,均有显著性差异(P<0.01);模型组在分别培养24h、48h、72h后油红O染色,倒置显微镜下观察,可见细胞内有大量橘红色和红色的脂滴出现,而正常组肝细胞则见少量橘红色和红色脂滴。与正常组比较,造模24ht寸肝细胞上清AST、LDH含量明显升高(P<0.01),ALT、ALP未见有显著变化(P>0.05);造模48h及72h时肝细胞上清中ALT、AST、ALP、LDH均显著上升(P<0.01或P<0.05)。2.PNS治疗24h后,自然恢复组与模型组比较,细胞内TG含量明显下降(P<0.01);与自然恢复组比较,PNS各治疗组细胞内TG含量均有明显下降(P<0.05和P<0.01),其中以低浓度组下降更为显著;油红O染色结果显示,自然恢复组和PNS各治疗组肝细胞内脂滴数较模型组明显减少,其中以PNS低浓度组减少最为明显。PNS治疗48h后,各治疗组与自然恢复组无明显差异(P>0.05),油红O染色结果显示,自然恢复组和PNS各治疗组肝细胞内脂滴较模型组明显减少,但各治疗组之间镜下观察无明显差异。3.与正常组比较,模型组肝细胞中SREBP-1c mRNA高表达(P<0.01);与模型组比较,自然恢复组SREBP-1c mRNA表达水平略有下降,但差异无统计学意义(P>0.05);与自然恢复组比较,PNS低浓度组SREBP-1c mRNA表达水平显著降低(P<0.05),而高浓度组虽有下降趋势但无统计学意义(P>0.05)。结论:1.高浓度血清可成功诱导建立L02肝细胞脂肪变性模型;控制高浓度血清,对肝细胞脂肪变性的逆转有较好的促进作用。2.PNS对脂肪变性肝细胞内TG水平具有明显的降低作用。3.脂质在肝细胞内的蓄积可能与细胞内SREBP-1cmRNA表达上调有关。PNS可以使脂肪变性L02肝细胞中SREBP-1c mRNA表达下调,提示SREBP-1c mRNA可能是PNS治疗脂肪变肝细胞的作用靶点之一,也可能是治疗NAFLD的作用靶点之一。
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