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目的: 观察艾灸对佐剂性关节炎模型小鼠镇痛效应规律,明确艾灸镇痛中TRPV家族的参与及作用机制,为从分子水平阐述艾灸局部作用的始动效应机制,进而为揭示艾灸作用原理提供新的思路和实验依据。 方法: 1.用Von Frey纤维丝筛选基础痛阈相同的小鼠,分为空白组、空灸组、模型组。模型组均采用足底注射完全弗氏佐剂建立佐剂性关节炎(AA)模型,再随机分为模型组和模灸组。空灸组和模灸组分别在“足三里”处艾灸15min,观察灸后不同时间点的痛阈。 2.采用TRPV阻断剂RR和激动剂2-APB对AA模型小鼠穴位局部进行预处理,再于“足三里”处艾灸15min,观察灸后不时间点痛阈的变化,并于灸后2小时取材,检测“足三里”局部组织中 TRPV1、TRPV2及TRPV3中蛋白表达量。 3.对生理状态和病理状态分别给予45℃、40℃及36℃三个不同温度的艾灸刺激15min,检测灸后2小时穴位局部中TRPV1、TRPV2及TRPV3的蛋白表达。 4.对阻断和激动预处理后的AA模型小鼠分别,给予45℃、40℃及36℃三个不同温度的艾灸刺激15min,检测灸后2小时穴位局部中 TRPV1、TRPV2及TRPV3的蛋白表达。 结果: 1.施灸15min后痛阈迅速提高(P<0.05),并在灸后30min左右达到高峰,灸后60min痛阈下降,至90min后渐降至灸前水平(P>0.05)。 2.阻断预处理AA小鼠灸后15min痛阈上升(P<0.05),随后下降至灸前水平(P>0.05)。激动预处理AA小鼠灸后15min痛阈上升(P<0.05),并在灸后30min到90min维持较高水平(P>0.05),灸后120min痛阈开始下降(P<0.05)。 3.灸后穴位局部组织中TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表达: (1)空灸组:与空白组相比,TRPV1表达减少(P<0.05),TRPV2表达减少(P<0.05),TRPV3无显著变化。 (2)模型组:与空白组相比,TRPV1表达减少(P<0.05),TRPV2表达减少(P<0.05),TRPV3表达减少(P<0.05)。 (3)模灸组:与模型组相比,TRPV1表达增加(P<0.05),TRPV2无显著变化(P>0.05),TRPV3无显著变化(P>0.05)。 4.生理状态下,不同温度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表达: (1)45℃:TRPV1表达无显著变化(P>0.05);TRPV2表达减少(P<0.05); TRPV3表达增加(P<0.05); (2)40℃:TRPV1表达减少(P<0.05);TRPV2表达减少(P<0.05);TRPV3表达无显著变化(P>0.05); (3)36℃:TRPV1表达减少(P<0.05);TRPV2表达减少(P<0.05);TRPV3表达无显著变化(P>0.05)。 5.病理状态下,不同温度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表达: (1) AA模型小鼠不同温度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表达: i.45℃:TRPV1表达增加(P<0.05);TRPV2表达增加(P<0.05);TRPV3表达增加(P<0.05); ii.40℃:TRPV1表达增加(P<0.05);TRPV2表达增加(P<0.05);TRPV3表达增加(P<0.05); iii.36℃:TRPV1表达无显著变化(P>0.05);TRPV2表达无显著变化(P>0.05);TRPV3表达无显著变化(P>0.05)。 (2)阻断预处理AA模型小鼠,不同温度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表达: i.45℃:TRPV1表达增加(P<0.05);TRPV2表达增加(P<0.05);TRPV3表达增加(P<0.05); ii.40℃:TRPV1表达增加(P<0.05);TRPV2表达增加(P<0.05);TRPV3表达增加(P<0.05); iii.36℃:TRPV1表达增加(P<0.05);TRPV2表达增加(P<0.05);TRPV3表达增加(P<0.05); (3)激动预处理AA模型小鼠,不同温度灸后TRPV1、TRPV2及TRPV3蛋白表达: i.45℃:TRPV1:45℃灸后,表达增加(P<0.05);TRPV2:45℃灸后,表达相当(P>0.05);TRPV3:45℃灸后,表达相当(P>0.05); ii.40℃:TRPV1表达增加(P<0.05);TRPV2表达相当(P>0.05);TRPV3表达相当(P>0.05); iii.36℃:TRPV1表达相当(P>0.05);TRPV2表达增加(P<0.05);TRPV3表达相当(P>0.05); 1.艾灸“足三里”能提高AA小鼠痛阈,镇痛持续时间大约1小时,连续多次艾灸具有累积效应。 2. TRPV家族参与艾灸镇痛的调节:阻断穴位局部TRPV,艾灸镇痛效应减弱,镇痛时间缩短;激动穴位局部 TRPV,艾灸镇痛效应增强,镇痛时间延长。 3.不同状态下,穴位局部TRPV表达不同:病理状态较生理状态TRPV表达减少。不同状态下,艾灸温热刺激均能影响穴位局部TRPV表达。 4.不同温度艾灸后,TRPV表达可能存在差异: (1)生理和病理状态下,较高温度艾灸刺激可引起TRPV表达增加 (2)病理状态下,可能存在TRPV1激活阈值的降低。