目的：喉癌约占全身癌肿的1％-5％，在耳鼻咽喉的恶性肿瘤中，约占7.9％-35％。目前大量的基础研究表明，血管的生成是实体肿瘤生长、发展、转移的关键。肿瘤微血管密度与其恶性表型及其生物学行为密切相关，如果没有血管生成，大部分肿瘤处于休眠状态，肿瘤维持微小状态不会对人体产生生命威胁。而肿瘤组织微血管的生成是血管生长因子和抑制因子失衡造成的，随着对肿瘤研究的深入，对血管生长因子和抑制因子的研究也越来越成为人们研究的热点问题。血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)是血管生长因子中与肿瘤血管生成关系最密切的因子，而内皮抑素(Endostatin)是新近研究发现的最理想的血管抑制因子。 Endostatin基因是OReilly等在治疗实体瘤研究中发现的一种蛋白质，在生物学活性上，主要表现为抑制内皮细胞增殖，并伴有诱导凋亡作用，而对非内皮细胞无增殖抑制作用。国外学者已经开始利用Endostatin进行肿瘤临床治疗研究，各种研究显示它有良好的临床应用前景。 VEGF和FGF-2是促进血管形成的重要因子，可以刺激内皮细胞分泌集中蛋白酶和蛋白酶活化因子，从而导致血管基底膜的降解，细胞得以侵入周围基质，迁移、增殖，最终分化而形成一个新的、含有一个空腔的血管。大量研究表明VEGF和FGF-2与促进血管形成和促进肿瘤转移密切相关。 本研究应用流式细胞术(FCM)检测喉鳞状细胞癌组织中Endostatin、VEGF及FGF-2的表达，分析其中的相互关系，进一步探讨血管因子与喉癌的发生、转移、恶化的关系，为肿瘤的基因治疗提供新的思路和方法。 方法： 1材料取材于2003年11月-2004年11月，河北医科大学附属第四医院耳鼻咽喉—头颈外科住院手术治疗的原发喉癌患者的新鲜癌组织50例及相应40例癌旁组织(距肿瘤边缘0.5cm)，另取非喉部肿瘤手术患者的喉腔粘膜组织10例作为正常对照。所有组织取材后立即用70％酒精固定，4℃冷藏保存。 2方法流式细胞术(FCM) 一抗：兔抗人IgG型Endostatin抗体：兔抗人IgG型FGF-2抗体，鼠抗人IgG2a型VEGF抗体：二抗：羊抗鼠FITC-IgG抗体。单细胞悬液制备，细胞免疫荧光染色后，上机检测。 3结果判定Endostatin、VEGF及FGF-2表达的蛋白定量以荧光指数(FI)表示。公式如下： FI=试验样品的均道值/对照样品的均道值均道值=logX-Modo×340阳性结果的判定：肿瘤组织的FI值大于正常组织的(-X)FI±2S为阳性，反之为阴性。(Endostatin以FI＞1.10为阳性，VEGF以FI＞1.28为阳性，FGF-2以FI＞1.28为阳性)。 4统计方法 所有数据经Excell数据库整理，应用SPSS11.0统计软件包进行方差分析，t、t检验，x2检验，Fisher精确计算和相关分析。以P≤0.05为差异在统计学上有显著性意义，P≤0.01为差异在统计学上有非常显著性意义。 结果： 1Endostatin的表达 Endostatin在喉癌组织中的表达量(FI=1.32)及阳性表达率(52％)与癌旁组织(FI=0.90，27.5％)和正常喉粘膜组织(FI=1.00，10％)相比，定量表达均有非常显著性差异(P=0.00)(P=0.012)，定性表达也有显著差异(x2=5.5097，P=0.019)(x2=4.3636，P=0.0367)，喉癌组织中的表达量及阳性表达率均高于癌旁组织及正常喉粘膜组织；癌旁组织与正常喉粘膜组织中的表达量及阳性表达率均无统计学差异。 有淋巴结转移(N+)组的喉癌组织中Endostatin的表达量(FI=1.21)和阳性表达率(86.67％)与无淋巴结转移(N0)组(FI=0.99，37.14％)相比，定量表达在统计学上有非常显著差异(t=8.22，P=0.000)。临床Ⅰ、Ⅱ期组的喉癌组织中Endostatin的表达量(FI=0.98)及阳性表达率(50％)与临床Ⅲ、Ⅳ期组(FI=1.20，83.33％)相比，定量表达及阳性表达率均有明显统计学差异(t=8.468，P=0.000)(X2=5.4329，P=0.0198)。临床Ⅲ、Ⅳ期组的表达量和阳性表达率均明显高于Ⅰ、Ⅱ期组。Endostatin在临床分型、性别、年龄中的表达量及阳性表达率均无统计学差异。 2VEGF的表达 VEGF在喉癌组织中的表达量(FI=1.34)及阳性表达率(62％)与癌旁组织(FI=0.94，12.5％)和正常喉粘膜组织(FI=1.00，0％)间均有非常显著性差异(P=0.00)(X2=22.6875，P＜0.0001)(P=0.002)(P=0.0002)，喉癌组织中的表达量及阳性表达率均低于癌旁组织及正常喉粘膜组织；癌旁组织与正常喉粘膜组织中的表达量及阳性表达率均无统计学差异(P=0.949，P=0.5714)。 N+组喉癌组织中VEGF的表达量(FI=1.36)和阳性表达率(93.33％)与N0组(FI=1.1292，48.57％)相比，定量表达及阳性表达率均有明显统计学显著差异(t=7.11，P=0.000)(X2=8.9296，P=0.0028)；临床Ⅰ、Ⅱ期组的喉癌组织中VEGF的表达量(FI=1.13)及阳性表达率(43.75％)与临床Ⅲ、Ⅳ期组(FI=1.3562，94.44％)相比，定量表达及阳性表达率均有明显统计学差(t6.084，P=0.00)(X2=10.5064，P=0.0012)，临床Ⅲ、Ⅳ期组的表达量和阳性表达率均明显高于Ⅰ、Ⅱ期组。VEGF在临床分型、性别、年龄中的表达量及阳性表达率均无统计学差异。 3FGF-2的表达 FGF-2在喉癌组织中的表达量(FI=1.28)及阳性表达率(68％)与癌旁组织(FI=0.91，15％)和正常喉粘膜组织(FI=1.00，0％)相比，定量表达均有非常显著性差异(P=0.000，P=0.000)，定性表达也有显著差异(X2=25.2810，P＜0.0001)(P=0.00007)，喉癌组织中的表达量及阳性表达率均高于癌旁组织及正常喉粘膜组织；癌旁组织与正常喉粘膜组织中的表达量及阳性表达率均无统计学差异。 有淋巴结转移(N+)组的喉癌组织中FGF-2的表达量(FI=1.215)和阳性表达率(100％)与无淋巴结转移(N0)组(FI=1.09，54.29％)相比，定性表达在统计学上有非常显著差异(t=7.11，P=0.000)，N+组中FGF-2的表达量明显高于N0组，但阳性表达率无统计学差异(P=0.0091)。临床Ⅰ、Ⅱ期组的喉癌组织中FGF-2的表达量(FI=1.1349)及阳性表达率(50％)与临床Ⅲ、Ⅳ期组(FI=1.3562)(100％)相比，有统计学差异(t=6.084，P=0.000)(X2=13.2353，P=0.0003)。FGF-2在临床分型、性别、年龄中的表达量及阳性表达率均无统计学差异。 4Endostatin、VEGF和FGF-2在喉癌组织中的表达的相关性 以Endostatin的表达量为自变量，以VEGF和FGF-2的表达为因变量，进行相关分析，无统计学意义。 结论： 1.Endostatin在喉癌组织中的定量及定性表达明显高于癌旁组织和正常粘膜组织，癌旁组织和正常粘膜组织的表达无差别。 2.VEGF、FGF-2在喉癌组织中的定量及定性表达明显高于癌旁组织和正常粘膜组织，癌旁组织和正常粘膜组织的表达无差别。 3.Endostatin在喉癌组织中表达与淋巴结转移及临床分期有关，淋巴结转移组和临床Ⅲ、Ⅳ期组中的定量及定性表达分别高于无淋巴结转移组和临床Ⅰ、Ⅱ期组；但表达与临床分型、患者年龄及患者性别无关。 3.VEGF、FGF-2在喉癌组织中表达与淋巴结转移及临床分期有关，淋巴结转移组和临床Ⅲ、Ⅳ期组中的定量及定性表达分别高于无淋巴结转移组和临床Ⅰ、Ⅱ期组；但表达与临床分型、患者年龄及患者性别无关。 4.Endostatin与VEGF、FGF-2在喉癌组织中的表达间无相关。