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目的:肾纤维化是各种不同病因所致的进展性肾脏疾病的共同结局。本文通过研究六味地黄汤对肾间质纤维化动物模型的抑制作用和胞红蛋白在肾间质纤维化两种重要细胞类型中的作用,为中药复方六味地黄汤防治肾纤维化提供现代科学理论基础,并为肾纤维化治疗靶点的寻找提供新线索。 方法:采用单侧输尿管梗阻手术建立肾间质纤维化模型,常规生化、病理染色等方法观察六味地黄汤对纤维化大鼠肾功能、肾组织形态学变化的改善作用。采用蛋白免疫印迹法明确了肾间质纤维化模型进程中细胞外基质沉积的改变及胞红蛋白分子的表达变化。制备胞红蛋白质粒,并用脂质体转染法使肾小管上皮细胞和成纤维细胞过表达胞红蛋白;采用蛋白免疫印迹和流式荧光技术等方法检测过表达胞红蛋白对TGF-β1刺激的两种细胞细胞外基质表达变化的影响及对细胞因子分泌的调节作用。 结果: 1.六味地黄汤能改善单侧输尿管梗阻所致肾纤维化大鼠的肾功能,减轻其病理改变及胶原沉积。 2.单侧输尿管梗阻所致肾纤维化模型中,肾组织α-SMA和纤连蛋白蛋白表达随纤维化进程明显增多,并可见肾组织胞红蛋白表达的增加。 3.TGF-β1刺激培养的人肾小管上皮细胞可使其纤连蛋白表达增加。 4.在人肾小管上皮细胞中过表达胞红蛋白,并给予TGF-β1刺激后可见其纤连蛋白表达进~步增加,且与细胞损伤无关。 5.TGF-β1刺激培养的成纤维细胞可使其发生活化,表现为α-平滑肌肌动蛋白和纤连蛋白表达增加,IL-6和MCP-1分泌增加。 6.在小鼠成纤维细胞中过表达胞红蛋白,并给予TGF-β1刺激后可见细胞活化表型被抑制,表现为α-平滑肌肌动蛋白和纤连蛋白表达减少;且这种抑制作用与其炎症因子、趋化因子的分泌关系不大,即胞红蛋白过表达对成纤维细胞分泌各种细胞因子无显著影响。 结论:六味地黄汤能够抑制单侧输尿管梗阻所致的肾间质纤维化。胞红蛋白对肾间质纤维化中两种关键细胞的作用不同,表现为对肾小管上皮细胞细胞外基质产生的促进作用和对成纤维细胞细胞外基质产生的拮抗作用。