论文部分内容阅读
第一部分hepaCAM在TCCB中表达及临床意义目的探讨肝细胞粘附分子(hepatocyte cell adhesion molecule, hepaCAM)在膀胱移行细胞癌(transitional carcinomal of the bladder, TCCB)中表达及与临床病理参数关系。方法采用半定量RT-PCR法检测hepaCAM基因在膀胱癌细胞株(T24、BIU-87)和55例TCCB组织及癌旁组织中hepaCAM mRNA表达、并分析其与临床病理参数间的关系。结果hepaCAM mRNA在膀胱癌细胞株(T24、BIU-87)中表达缺失,hepaCAM mRNA在TCCB组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.001), hepaCAM mRNA表达与TCCB临床分期有关(P<0.05),而与病理分级、性别、年龄无关。结论hepaCAM mRNA在膀胱癌细胞株(T24、BIU-87)及TCCB组织中表达明显下降或缺失,且与临床分期有关,推测hepaCAM可能是TCCB新的候选抑癌基因。第二部分TCCB中hepaCAM基因外显子2甲基化状态分析目的检测膀胱癌细胞株(T24、BIU-87)和TCCB组织中hepaCAM外显子2的甲基化情况,探讨hepaCAM基因在TCCB中表达下调是否与hepaCAM外显子2的甲基化有关,从表观遗传学角度探讨膀胱癌发病的机制。方法采用甲基化敏感性限制性内切酶PCR法检测膀胱癌细胞株(T24、BIU-87)和TCCB组织中hepaCAM外显子2甲基化情况,分析其与临床病理参数之间的关系,并探讨TCCB组织中hepaCAM外显子2甲基化与hepaCAM mRNA表达之间的关系。结果甲基化敏感性限制性内切酶PCR检测发现膀胱癌细胞株(T24、BIU-87)和52.7%(29/55)TCCB组织中存在hepaCAM外显子2甲基化,而相应的癌旁组织甲基化率为5.5%(3/55),hepaCAM外显子2甲基化率在癌及癌旁组织中的差异具有显著统计学意义(P<0.001)。hepaCAM外显子2甲基化与hepaCAM mRNA表达呈负相关(r=﹣0.403,P<0.05)。结论hepaCAM外显子2甲基化是导致TCCB组织中hepaCAM mRNA表达下调的主要原因之一,为探讨揭示TCCB发生发展机制提供新的理论依据。第三部分DNA甲基化调控膀胱癌细胞株hepaCAM表达的机制目的探讨5-氮2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)(DNA甲基化转移酶抑制剂)对膀胱癌细胞株(T24、BIU-87)中hepaCAM表达的调控作用及对细胞生长增殖的影响。进一步探讨hepaCAM外显子2甲基化导致hepaCAM下调TCCB发生的机制。方法分别用不同药物浓度的5-Aza-CdR处理T24和BIU-87细胞株,MTT法检测5-Aza-CdR对细胞增殖的影响,采用甲基化敏感性限制性内切酶PCR法hepaCAM基因外显子2区域甲基化状态,RT-PCR法检测5-Aza-CdR处理前后hepaCAM mRNA的表达情况。结果5-Aza-CdR具有抑制T24和BIU-87细胞增殖作用。未经5-Aza-CdR处理的T24和BIU-87细胞hepaCAM mRNA不表达,且hepaCAM基因外显子2区高甲基化;经5-Aza-CdR处理后T24和BIU-87细胞hepaCAM基因表达,细胞中hepaCAM基因外显子2区甲基化状态得到逆转。结论5-Aza-CdR能有效逆转膀胱癌T24和BIU-87细胞hepaCAM基因外显子2的异常甲基化,从而诱导hepaCAM基因的重新表达,抑制肿瘤细胞生长,结果表明:hepaCAM外显子2甲基化是促进hepaCAM表达下调从而导致膀胱癌发生的新的分子机制,为TCCB治疗提供新的思路。