抗白灵抗白血病作用的研究

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目的:迄今白血病的治疗仍然以化疗为主,而化疗药物副作用大,均严重抑制骨髓造血功能及机体的免疫功能。临床上可出现重症感染、出血,危及患者生命,影响患者的生活质量。上世纪80年代以来,国内外有不少研究者研究发现部分天然药物不仅副作用小,还有注重整体、攻补兼施的优点,所以从中药及天然药物提取有效制剂已经成为抗白血病的另一重要途径。我国学者在近年来,即已开始进行了中药诱导肿瘤细胞凋亡和分化的研究,至目前为止,已发现了许多中药提取物,在体外实验中显示有诱导肿瘤细胞凋亡或分化的作用。抗白灵是在我教研室多年研制的参术合剂基础上改良的中药制剂,本实验采用细胞体外培养,观察抗白灵对白血病细胞有无杀伤或诱导凋亡及分化作用,从细胞及分子水平探讨其作用机理,目的是为寻找一种选择性杀伤白血病细胞、高效低毒的诱导分化及凋亡的中药方剂提供实验依据。 方法:1.通过MTT试验、台盼蓝拒染检测活细胞数,观察不同浓度抗白灵作用后HL-60细胞增殖的改变;2.通过细胞形态学、流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳进行细胞凋亡的检测和观察;3.以药物维甲酸为阳性对照组,采用6.25mg/ml浓度抗白灵作用HL-60细胞72小时,通过细胞形态学观察、硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验、细胞吞墨实验来观察抗白灵作用后HL-60细胞分化情况。4.采用二步法体外药物作用前后原代白血病祖细胞集落(CFU-L)生长抑制实验及正常粒单祖细胞集落(GM-CFU)生长抑制实验,观察不同浓度抗白灵对CFU-L集落的作用及对正常GM-CFU集落体外生长的影响。 结果:1.在6.25mg/ml-50mg/ml浓度范围内,抗白灵对HL-60细胞的增殖有的抑制作用并呈剂量、时间依赖关系,半数抑制浓度约为25.0mg/ml。2.典型的细胞形态学改变、DNA琼脂糖凝胶电泳条形梯带的出现和流式细胞仪检测亚G1峰的检出等证实抗白灵能诱导白血病细胞凋亡;3.NBT还原实验和细胞吞墨实验:在抗白灵(浓度为6.25mg/ml)作用72小时后,NBT阳性反应率和细胞吞墨率分别为50.8%和56.0%,明显高于对照组。全反式维甲酸(10-6mol/L)作用组NBT阳性反应率和细胞吞墨率分别为55.3%和69.晰,稍高于抗白灵作用组,但无统计学差异。形态学观察可见细胞向成熟细胞阶段分化;4.抗白灵在12.smg/ml一25.omg/ml范围内能显著抑制体外白血病祖细胞集落的形成,但对正常祖细胞集落的形成影响不大,二者之间有显著性差异。 结论:本实验发现抗白灵抑制1丑‘,60细胞增殖并呈剂量、时间依赖关系,既能影响细胞周期时相,使细胞滞留于G、期,诱导HL60细胞凋亡,又能促进HL一60细胞分化,其诱导分化能力与阳性药物维甲酸相近,而且对白血病祖细胞具有选择性抑制作用。提示抗白灵可能会成为一种治疗白血病很有应用前景的天然中药制剂。
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