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目的：大鼠胚胎脊髓来源的神经干细胞（Neural stem cell, NSC）的体外培养和鉴定。方法：采用酶消化和机械分离法结合从孕13.5天的携带绿色荧光蛋白（Greenfluorescent protein，GFP）的转基因大鼠胚胎脊髓中分离、培养神经干细胞，采用免疫荧光染色方法检测培养细胞的巢蛋白（Nestin）、溴脱氧尿苷（Bromodeoxyuridine，BrdU）、神经元核蛋白（Neuronal nuclei，NeuN）和胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein，GFAP）的表达情况，对培养细胞进行鉴定。结果：GFP转基因大鼠胚胎脊髓来源的神经干细胞在体外培养环境下生长良好，表达GFP和特异性蛋白Nestin，BrdU染色阳性，在添加血清后能表达NeuN和GFAP蛋白。结论：从GFP转基因大鼠胚胎脊髓中分离培养的细胞能表达神经干细胞特异性蛋白，具有自我更新能力和一定条件下的多向分化能力，证实是神经干细胞。目的：研究氯化锂对体外培养的神经干细胞的增殖和分化的影响。方法：在神经干细胞培养液内添加氯化锂，观察不同浓度的氯化锂对神经干细胞生长状态的影响；用免疫荧光方法检测神经干细胞BrdU、NeuN、GFAP的表达情况。结果：添加1mM氯化锂的神经干细胞的生长良好，3mM的氯化锂会抑制神经干细胞的生长，6mM的氯化锂会造成神经干细胞死亡。在保留或去除表皮生长因子（Epidermal Growth Factor，EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（Fibroblast growthfactor-basic，bFGF）的情况下，1mM的氯化锂均能明显增加神经干细胞的BrdU表达；与对照组比较，氯化锂处理组神经干细胞的NeuN阳性神经元比例明显增加，GFAP阳性胶质细胞的比例明显减少。结论：1mM浓度的氯化锂对神经干细胞的生长没有毒性作用，能促进神经干细胞的增殖，促进神经干细胞向神经元方向分化，抑制神经干细胞向胶质细胞方向分化。目的：研究氯化锂对移植到胫神经内的神经干细胞的存活、分化的影响；研究神经干细胞移植和氯化锂处理对宿主神经轴突溃变、炎症细胞浸润及神经营养因子表达的影响。方法：结扎成年大鼠右侧胫神经，将培养的神经干细胞移植到胫神经远端，腹腔注射氯化锂或生理盐水，一周后用免疫荧光染色方法检测神经干细胞的Nestin、NeuN、胆碱乙酰转移酶（Cholin acetyltransferase，ChAT）、GFAP、神经纤丝蛋白200（Neurofilament200kDa，NF200）、巨噬细胞抗原（ED1）的表达情况；用免疫印迹法（Western bloting，WB）检测坐骨神经内脑源性神经营养因子（Brainderived neurotrophic factor，BDNF）的表达。结果：移植到胫神经内的神经干细胞存活良好，并沿神经轴索间隙向周围扩散。移植后的神经干细胞未见明显Nestin阳性表达，大部分移植细胞呈GFAP阳性表达，无明显NeuN或ChAT阳性表达。腹腔注射氯化锂能显著减少移植细胞的GFAP阳性表达比例。胫神经结扎后，神经内轴突溃变明显。与未移植NSC的两组比较，NSC移植组胫神经内NF200阳性表达明显增多，联合应用氯化锂能进一步增加NF200的表达。应用氯化锂显著减少NSC移植后胫神经内的ED1表达。单纯神经干细胞移植组和单纯氯化锂组的宿主坐骨神经的BDNF表达明显上调，两者联用时BDNF表达上调更明显。结论：胫神经内移植的神经干细胞存活良好，大部分分化为GFAP阳性的胶质细胞；氯化锂处理能减少移植后的神经干细胞向胶质细胞方向的分化，神经干细胞移植联合应用氯化锂可以减少宿主神经轴突的溃变程度，抑制神经干细胞移植后的巨噬细胞浸润；上调宿主胫神经内BDNF的表达。目的：研究含有神经干细胞的胫神经移植联合氯化锂对脊髓损伤的治疗作用。方法：在大鼠胫神经内移植神经干细胞一周后，建立胸段脊髓右侧半切损伤模型，将单纯胫神经或预先移植有神经干细胞的胫神经段植入脊髓缺损区，腹腔注射氯化锂或生理盐水，术后2周、4周分别测定大鼠下肢运动功能恢复情况。术后4周用免疫荧光染色方法检测移植后神经干细胞的存活和分化情况，宿主脊髓运动神经元存活情况，移植神经段的轴突再生情况，观察宿主脊髓损伤修复和巨噬细胞浸润情况。结果：脊髓半切损伤移植胫神经后2周及4周，移植神经干细胞或采用氯化锂治疗的大鼠下肢运动恢复较好，神经干细胞移植联合应用氯化锂对脊髓损伤大鼠下肢功能恢复的促进作用更明显。移植的胫神经段与宿主脊髓整合良好，移植到胫神经内的神经干细胞存活良好。氯化锂促进移植的NSC发出轴突长入宿主脊髓，促进神经干细胞分化为NF200阳性的神经元。与单纯胫神经移植比较，神经干细胞移植和氯化锂治疗组损伤侧宿主脊髓神经元数量明显增多，移植神经段内NF200阳性神经纤维明显增多，移植部位GFAP胶质瘢痕范围较小，ED1表达也明显减少。神经干细胞移植联合氯化锂治疗组的上述各指标均高于其他各组。结论：在脊髓半切损伤后移植含有神经干细胞的胫神经或氯化锂治疗能显著促进实验大鼠下肢功能的恢复，显著减少宿主脊髓运动神经元死亡，促进轴突再生，抑制炎症反应，缩小胶质瘢痕的范围。神经干细胞移植联合联合氯化锂治疗能取得更好的治疗效果。