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背景：细胞凋亡是缺血再灌注损伤中细胞死亡的主要形式。氧化应激条件下,衔接蛋白p66Shc的激活受到PKCβ的调控，在细胞凋亡中发挥重要作用。PKCβ2的激活与缺血再灌注损伤关系密切，然而在肠缺血再灌注中，PKCβ2引起氧化应激和细胞凋亡的机制尚不明确。目的：探讨肠缺血再灌注损伤中PKCβ2的作用机制；探讨PKCβ2/p66Shc信号通路在肠缺血再灌注损伤中的作用。方法：1、PKCβ2在肠缺血再灌注损伤中的特异性激活24只雄性ICA小鼠，随机分成四组：（A）正常对照组；（B）肠缺血45分钟再灌注45分钟组；（C）肠缺血45分钟再灌注90分钟组；（D）肠缺血45分钟再灌注180分钟组。构建小鼠肠缺血再灌注模型（术前12h禁食，采取腹腔麻醉，分离肠系膜上动脉夹闭阻断血供，一段时间后去除夹闭恢复血供）。2、鲁伯斯塔对肠缺血再灌注损伤的保护作用24只雄性ICA小鼠，随机分成四组：（A）正常对照组；（B）肠缺血45分钟再灌注90分钟组；（C）正常对照+鲁伯斯塔（Ruboxistaurin，PKCβ抑制剂）组；（D）肠缺血45分钟再灌注90分钟+鲁伯斯塔组。构建小鼠肠缺血再灌注模型（术前12h禁食，采取腹腔麻醉，分离肠系膜上动脉夹闭阻断血供，一段时间后去除夹闭恢复血供）。鲁伯斯塔给药组于术前按每天10mg/kg连续灌胃给药，连续给予三天。3、肠缺血再灌注/缺氧复氧中PKCβ2对p66Shc特异性调控细胞缺氧复氧模型的构建：Caco-2细胞于低氧培养箱中低氧培养15h(5%CO2、1%O2)，低氧结束后正常培养条件下培养6h。用Lipofectamine2000，将PKCβ2的靶序列siRNA以及阴性对照序列导入细胞，作用6h后更换正常培养基，继续培养36h。4、PKCβ2/p66Shc信号通路对肠缺血再灌注损伤的保护机制。评估缺血再灌注后肠道的氧化应激状态，检测肠组织中MnSOD,GSH,GSH-Px和MDA的水平。评估缺血再灌注后肠道的细胞凋亡状态，检测凋亡细胞的数目和凋亡标记蛋白cleavedcaspase-3的水平。结果：1、PKCβ2在肠缺血再灌注损伤中的特异性激活缺血再灌注后PKCβ2存在显著地细胞膜转位，而PKCβ1,PKCδ,andPKCε在细胞膜上的分布无明显改变。缺血再灌注后PKCβ2在苏氨酸T-641位点的磷酸化水平显著升高，导致磷酸化PKCβ2/细胞总PKCβ2比例明显增加。2、鲁伯斯塔对肠缺血再灌注损伤的保护作用鲁伯斯塔保护缺血再灌注后肠粘膜形态结构的完整性，降低了炎性细胞浸润和病理评分；减轻肠缺血再灌注后炎症因子TNF-α和IL-6释放入血。鲁伯斯塔抑制肠缺血再灌注后PKCβ2细胞膜转位及磷酸化活化；抑制肠缺血再灌注后p66Shc激活。3、肠缺血再灌注/缺氧复氧中PKCβ2对p66Shc特异性调控正常含氧量条件和缺氧复氧条件下siRNA-PKCβ2降低了PKCβ2的表达及PKCβ2的磷酸化激活；正常含氧量条件下siRNA-PKCβ2对p66Shc的活化无影响，而在缺氧复氧条件下，siRNA-PKCβ2抑制p66Shc的过表达及磷酸化激活；PMA（PKC的激动剂）明显增加Caco-2细胞的磷酸化，这一过程被siRNA-PKCβ2和鲁伯斯塔显著抑制。4、PKCβ2/p66Shc信号通路对肠缺血再灌注损伤的保护机制。鲁伯斯塔逆转肠缺血再灌注诱导的MnSOD的下调；抑制缺血再灌注后肠组织中活性氧簇的累积；保护缺血再灌后GSH系统的耗竭和GSH-Px活性的降低。鲁伯斯塔减少缺血再灌后肠粘膜凋亡细胞的数目；抑制缺血再灌注后细胞凋亡标记蛋白cleavedcaspase-3的水平。结论：1、PKCβ2在肠缺血再灌注后发生特异性激活；提示PKCβ2有可能是肠缺血再灌注损伤的重要调控靶点。2、鲁伯斯塔对肠缺血再灌注损伤起保护作用；这种保护作用可能是通过抑制PKCβ2的活化，进而抑制p66Shc的激活实现的。3、肠缺血再灌注/缺氧复氧中PKCβ2对p66Shc特异性调控。4、选择性抑制PKCβ2减轻p66Shc介导的氧化应激损伤及随后的细胞凋亡，对肠缺血再灌注损伤起保护作用。总之，选择性抑制PKCβ2减轻受体蛋白p66Shc所介导的氧化应激和随后的细胞凋亡，对小鼠的肠缺血再灌注损伤起保护作用。这可能成为小肠的缺血再灌注损伤的一个新的治疗靶点。